大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养

发布时间：2017-11-13 07:36

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养

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【摘要】：目的评价脱细胞脊髓支架在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养中的作用,探索最佳接种浓度。方法分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs,诱导BMSCs向神经元样细胞分化。制备脱细胞脊髓支架,将第3代BMSCs同脱细胞脊髓支架共培养,MTT法检测细胞增殖活性,比较与普通培养的差异;取第3代BMSCs以不同浓度[(0.5、1、2、3、4)×106/mL]接种于支架(脊髓支架修整0.5cm小段),检测细胞在支架上的粘附率及上架细胞数,建立接种浓度与细胞粘附率、上架细胞数的关系回归方程;扫描电镜观察脱细胞脊髓支架形态以及细胞与支架的粘附情况。结果成功实现BMSCs的分离及培养,BMSCs流式鉴定CD29、CD90阳性表达,向神经元诱导胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)呈阳性表达;与普通培养相比,BMSCs在支架上细胞增殖活力显著提高(P0.05);细胞与支架的粘附率在接种浓度为2×106/mL最高,达到(79.6±2.7)%,单位体积上架细胞数达到(1.364±0.047)×106/cm3;扫描电镜观察支架空间结构良好,细胞与支架粘附良好,共培养第3天较第1天细胞数量明显增加。结论脱细胞脊髓支架具有多通道的空间结构,适合BMSCs粘附、存活、增殖,该支架是良好的天然脊髓组织工程材料。当粘附率及细胞上架数基本达到最大时的最佳接种浓度为2×106/mL。
【作者单位】： 第三军医大学新桥医院骨科;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81271362);国家自然科学基金青年项目(31000438) 全军医学科技“十二五”科研重点项目(BWS11C040)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 脊髓损伤是一种严重威胁人类健康的疾病,由于脊髓损伤后极难再生,因此较难治愈。脊髓损伤修复一直是医学界的研究热点。目前治疗脊髓损伤的方法主要集中在细胞移植和组织工程。我们最早报道了脱细胞脊髓支架的研究工作[1-2]。构建脊髓组织工程核心包括细胞组织工程支架与种子

【参考文献】

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本文编号：1179754