IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选

发布时间：2017-11-27 14:09

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【摘要】：目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右。扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右。分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37%的scFvs与IL-4有结合特性,有约27%的scFvs与IL-13有结合特性。筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体。
【作者单位】： 泸州医学院基础医学院;
【基金】：国家自然科学基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 泸州市科技局项目(2010-S-13)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 白细胞介素(IL)IL-4和IL-13表达于2型辅助性T细胞(Th2)和肥大细胞上,是遗传性过敏症和过敏性炎症疾病如哮喘发病机制中关键的细胞因子[1,2]。IL-4和IL-13都可促进急性炎性过程和呼吸道基本结构的变化,促进其受体在多种类型的细胞上表达[3]。遗传性过敏症和过敏性炎症疾病的一

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本文编号：1232102