shRNA特异性静默大鼠肺泡巨噬细胞TLR2基因对染尘大鼠肺纤维化的抑制作用

发布时间：2017-11-27 12:28

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【摘要】：目的构建表达大鼠TLR2的shRNA慢病毒载体,并研究其在染尘大鼠肺组织内对巨噬细胞功能的抑制效应。方法设计并构建具有干扰效力的shRNA表达质粒,筛选出对TLR2干扰效果最好的一段序列,使用Gateway方法重组到慢病毒表达载体中进行包装,采用包装好的慢病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,ELISA法检测TGF-β1、IL-1β、IL-6的表达情况;而后,在大鼠矽肺模型中引入TLR2慢病毒载体,观察矽肺发生和进展情况。结果成功筛选出具有良好TLR2表达干扰效果的shRNA,并成功包装入慢病毒,慢病毒滴度为1.0×106TU/ml,转染慢病毒的肺泡巨噬细胞释放TGF-β1、IL-1β、IL-6均显著减少(P0.05);转导了干扰病毒载体的矽肺大鼠,其矽肺发生发展受抑情况均优于对照组。结论成功构建了表达大鼠TLR2 shRNA的慢病毒,具有良好的抑制TGF-β1、IL-1β、IL-6功能,并能有效抑制矽肺的发生发展,揭示TLR2可能成为治疗肺纤维化的潜在靶点。
【作者单位】： 同济大学附属上海市肺科医院;第二军医大学研管大队临床十队;第二军医大学免疫学教研室;
【分类号】：R363
【正文快照】： 一般认为,SiO2粉尘长期刺激肺泡,引发慢性肺泡炎症,导致肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)分泌多种细胞因子和炎性介质,作用于肺间质细胞和成纤维细胞,促使成纤维细胞大量增殖和胶原沉积[1～3]。因此作为尘肺的重要启动细胞,AM触发炎症应答的作用一直受到重视[4]。Toll样

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本文编号：1231872