转化生长因子β1联合软骨源性形态发生蛋白-2体外诱导成肌细胞向软骨细胞的分化

发布时间：2017-12-01 23:08

  本文关键词：转化生长因子β1联合软骨源性形态发生蛋白-2体外诱导成肌细胞向软骨细胞的分化

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【摘要】：目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)联合软骨源性形态发生蛋白-2(CDMP-2)体外诱导犬成肌细胞向软骨细胞表型定向分化的可行性。方法:取成年比格犬大腿股直肌肌肉,以机械分解法与二步酶消化法分离获得成肌细胞,取第4代成肌细胞,以2.0×104细胞/cm2的密度接种于24孔培养板,使用含CDMP-2和(或)TGF-β1的完全培养液诱导分化成肌细胞,观察细胞生长情况。诱导14 d后获取细胞,进行HE染色、甲苯胺蓝染色,观察细胞形态及胞内高硫酸化的蛋白聚糖变化。免疫细胞化学染色检测II型胶原蛋白着色情况。RT-PCR检测I型、II型胶原蛋白、aggrecan及Sox9 mRNA表达。阿尔新蓝法定量检测细胞糖胺聚糖(GAG)含量。结果:3个加入细胞因子的实验组成肌细胞形态由长梭形向多角形、类圆形转变;HE染色、甲苯胺蓝染色和软骨特异性I型和Ⅱ型胶原免疫组化法检测及RT-PCR检测中,实验组均有不同程度的阳性表达;TGF-β1与CDMP-2联合应用组糖胺聚糖含量明显高于其他三组(P0.05)。结论:CDMP-2和TGF-β1可以单独诱导高密度单层培养的犬成肌细胞向软骨细胞分化,表达软骨细胞特异性细胞表型,并且CDMP-2和TGF-β1有协同作用。
【作者单位】： 江苏省无锡市第二人民医院骨科;上海同济大学附属东方医院运动创伤关节外科;
【基金】：上海市自然科学基金项目(09ZR1425500)
【分类号】：R329
【正文快照】： 种子细胞是组织工程研究中最基本、最重要的因素之一,是组织工程的生命源泉。理想的种子细胞来源匮乏,严重限制了软骨组织工程的临床应用和推广[1]。高效、大量获取优良种子细胞是组织工程学需要解决的首要问题[2]。成肌细胞(skeletalmyoblasts)是组织工程学种子细胞之一,具

【共引文献】

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本文编号：1242768