大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白分布的变化及意义

发布时间：2017-12-09 23:06

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白分布的变化及意义

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【摘要】：目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamy-cin,mTOR)分布的变化及意义。方法常规体外培养大鼠MSCs,采用β-巯基乙醇诱导MSCs分化为神经细胞。实验分MSCs空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)阴性对照组、β-巯基乙醇诱导组、不同浓度雷帕霉素干预组、不同浓度雷帕霉素干预+β-巯基乙醇诱导组。采用免疫荧光法检测诱导前后mTOR在细胞内的分布,激光共聚焦显微镜观察照相;Westernblot法检测诱导前后神经细胞相关蛋白和mTOR通路蛋白的表达。结果①诱导前mTOR主要在MSCs细胞核内点状分布,细胞质也有少量的分布;诱导后核内荧光信号减弱,mTOR向细胞质转移。雷帕霉素处理后,随着雷帕霉素浓度的提高(10～30μmol/L),mTOR向细胞质转移越明显。雷帕霉素浓度超过50μmol/L后,细胞形态变圆,部分细胞脱壁,死亡率显著增加(P0.05)。②β-巯基乙醇可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,诱导后神经细胞Tau蛋白、MAP-2蛋白表达显著增加。雷帕霉素(10～30μmol/L)干预后,随着雷帕霉素浓度(10～20μmol/L)的提高,Tau蛋白、MAP-2蛋白表达逐渐增加,30μmol/L时Tau蛋白、MAP-2蛋白表达下降(P0.05)。③Western blot检测结果提示,诱导前后总mTOR表达不变;磷酸化mTOR、磷酸化p70S6K、磷酸化4EBP1诱导后较诱导前表达下降(P0.05),雷帕霉素干预后下调更加显著(P0.05)。结论 mTOR在MSCs神经分化过程中由细胞核内向细胞质转移,活性下降,表达下调,提示mTOR在MSCs神经分化过程中可能发挥了重要作用。
【作者单位】： 郑州大学第一附属医院神经内科;
【基金】：国家自然科学基金(81071114)~~
【分类号】：R322.8
【正文快照】： 雷帕霉素靶蛋白(taeget of rapamycin,TOR)是近年来发现的一类进化上非常保守的蛋白激酶家族,广泛存在于各种生物细胞中。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸-苏氨酸激酶,可调节细胞生长、增殖及一些细胞内活动,如mRNA转录及翻译、自噬

【参考文献】

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1 景黎君;贾永林;鲁晶晶;韩瑞;王舒阳;李尽义;彭涛;贾延R，

本文编号：1272171