Axl-siRNA核转染对髓源性DC前体细胞分化的影响

发布时间：2017-12-22 07:19

  本文关键词：Axl-siRNA核转染对髓源性DC前体细胞分化的影响　出处：《华中科技大学学报(医学版)》2013年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的将Axl(Anexelekto)-siRNA(small interfering RNA)序列核转染于髓源性树突状细胞(dendritic cells,DC)前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况。方法构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱导向DC分化;根据是否转染Axl-siRNA,将实验分为空白对照组和Axl-siRNA核转染组;转染后荧光显微镜观察细胞荧光水平以评估转染效率;通过锥虫蓝染色观察细胞的存活情况;观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况,绘制生长曲线;转染后第8天流式细胞术检测DC的表面标志CD11c+。结果转染后1~3d荧光表达率分别为(70.5±6.3)%、(72.6±7.3)%、(68.8±6.5)%,而后荧光逐渐减弱并淬灭;核转染后细胞的死亡率为(21.2±5.4)%;空白对照组细胞在培养的前3d内的生长曲线呈对数增长,第4至6天,细胞数稳定在(2.38~2.47)×106/孔,培养后第7、8天细胞数略有下降,为(2.23~2.31)×106/孔;Axl-siRNA核转染组细胞生长曲线也呈现相同的趋势,但与空白对照组相比每阶段的细胞计数略有减少;细胞培养8d后,空白对照组和Axl-siRNA核转染组CD11c+的细胞百分比分别为(70.28±6.13)%和(67.53±7.45)%。结论 Axl-siRNA核转染法对髓源性DC前体细胞具有较高的转染效率,不影响DC的生长和分化;Axl-siRNA核转染法是研究DC功能的一种有效手段。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所 卫生部器官移植重点实验室 器官移植教育部重点实验室;海军工程大学海工医院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81072441)
【分类号】：R392
【正文快照】： 树突状细胞(dendritic cells,DC)在免疫应答中起着重要作用。通过对DC分化基因进行干预,可以影响DC的成熟,进而调控DC的抗原提呈能力。由骨髓原代细胞中的DC前体细胞(pre-DC)分化获取DC,是一种常规、稳定的方法[1]。在原代细胞的分化干预中,脂质体法效率较低,慢病毒载体可感

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本文编号：1318907