抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

发布时间：2017-12-24 04:15

  本文关键词：抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用　出处：《第三军医大学学报》2013年06期 　论文类型：期刊论文

  更多相关文章： 降钙素原 原核表达 单克隆抗体 特性鉴定 ELSIA检测

【摘要】：目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Western blot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgG1和IgG2a,最高效价为1∶1 024 000,亲和力最高可达到1.3×109L/mol;选取2-D7经Western blot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。
【作者单位】： 第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室;
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 降钙素原(procalcitonin,PCT)是一种无激素活性的降钙素前肽物质[1],来自于定位第11号染色体上的单拷贝基因,该基因由2 800个碱基对组成,含6个外显子和5个内含子,相对分子质量约为13×103。在正常代谢下,甲状腺C细胞产生PCT并分泌激素活性的降钙素。正常人血中PCT浓度极低,但

【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 郭建秀;李鹏;伍艳芳;易维京;刘进军;郭鹰;唐捷;胡川闽;;抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定[J];第三军医大学学报;2006年06期

2 易维京;李鹏;李淑慧;智强;胡川闽;;人NT-proBNP的高效原核表达及免疫学检测标准品的研究[J];第三军医大学学报;2008年06期

3 郭杰标;郭锐;刘艳华;;以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究[J];南方医科大学学报;2006年07期

【共引文献】

相关期刊论文 前9条

1 李新军;张竹君;易维京;陈安;李淑慧;赵忠颢;刘明栋;范毓东;胡川闽;;抗preS1分子高效单克隆抗体的制备及其在血清LHBs检测中的应用[J];第三军医大学学报;2011年06期

2 张阳;陈莎;胡川闽;李淑慧;万瑛;;抗hMIF单克隆抗体的活性鉴定及其对脓毒症小鼠的保护作用[J];第三军医大学学报;2012年03期

3 陈锐;刘友生;朱江;段光杰;易维京;胡川闽;;人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)的原核表达及抗原性分析[J];免疫学杂志;2009年03期

4 毕华;丁有学;王兰;刘兰;韩春梅;李永红;饶春明;;ELISA法间接检测血管内皮生长因子抑制剂的相对结合力[J];中国生物制品学杂志;2010年06期

5 王伟伟;王远征;张国强;马昱;;狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用[J];中国生物制品学杂志;2011年11期

6 丛珊;张阳;张竹君;易维京;陈安;胡川闽;余晓东;李淑慧;;心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究[J];中国医药指南;2012年04期

7 戴启宇;邓昆;王会英;刘宇;杨廷桐;陆建福;钱磊;;抗人凋亡诱导因子单克隆抗体的制备与鉴定[J];中国组织工程研究;2012年42期

8 兰向莉;李晓;马延森;靳亚平;;Luman-N端融合蛋白单克隆抗体的制备[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2013年02期

9 张鸯;陶明亮;路保通;靳亚平;;抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2013年03期

相关会议论文 前1条

1 王伟伟;张国强;;狂犬病病毒抗体检测中竞争ELISA检测方法广谱包被抗原的选择[A];2011中国生物制品年会暨第十一次全国生物制品学术研讨会论文集[C];2011年

相关博士学位论文 前1条

1 易维京;心衰标志物NT-proBNP高效免疫传感器检测的关键技术研究[D];第三军医大学;2011年

相关硕士学位论文 前7条

1 李新军;抗preS1高特异性单克隆抗体的制备及其在血清LHBs检测中的应用[D];第三军医大学;2011年

2 刘保才;肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体制备及初步应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

3 张鸯;抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[D];西北农林科技大学;2008年

4 陈雯;百日咳丝状血凝素（FHA）的纯化、抗-FHA单克隆抗体的研制及初步应用[D];武汉生物制品研究所;2010年

5 王伟伟;狂犬病病毒抗体酶联诊断试剂的研制[D];北京生物制品研究所;2010年

6 张鹏;重金属铅单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[D];四川农业大学;2010年

7 丛珊;心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）的原核表达、纯化及其单克隆、多克隆抗体的制备与应用研究[D];重庆师范大学;2012年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前7条

1 袁盛凌,段海清,张兆山;蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆[J];生物技术通讯;2003年05期

2 傅思武,周殿元,赖卓胜,薛净;抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年03期

3 王正国;脓毒症研究概况[J];中华创伤杂志;2003年01期

4 王刚垛,鱼涛,马兆扬,李秋生,何凤生;甲基对硫磷单克隆抗体的研制及鉴定[J];中华劳动卫生职业病杂志;2001年04期

5 王刚,王琰,化冰,乔媛媛,刘玉峰;链替换技术提高抗角蛋白人Fab抗体的亲和力[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年02期

6 朱勇,金伯泉,刘雪松;用生物传感器测定重组人α2a-干扰素单克隆抗体的亲和力及抗原识别表位[J];中国免疫学杂志;2000年06期

7 李革,熊杰,刘志峰;巨细胞病毒特异性IgG抗体亲和力测定及其临床意义[J];中国实用儿科杂志;2001年03期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王海燕;姜平;杜以军;李玉峰;李军星;沈芳;;猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP2的原核表达及其单克隆抗体的制备[J];中国生物工程杂志;2008年02期

2 侯强;彭伍平;孙元;仇华吉;;猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备[J];中国兽医科学;2008年01期

3 罗正;刘若尘;郑世军;;单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及其单克隆抗体的制备[J];生物工程学报;2009年11期

4 郭鹭;荆志强;李俚;鞠环宇;马波;王君伟;;抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国兽医科学;2010年02期

5 肖成蕊;宋战昀;杨立英;王伟利;孟庆峰;孟日增;;H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J];动物医学进展;2011年06期

6 王建和;顿新鹏;曲丽娜;杨唐斌;陈正望;;抗豌豆白蛋白1b单克隆抗体的制备与特性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年02期

7 刘芳芳;金梅林;张安定;但汉并;陈焕春;;禽流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

8 葛叶;邓国华;李雪平;陈化兰;;流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备[J];中国预防兽医学报;2009年09期

9 王捷;刘增田;杨太成;杨静;冼江;刘大志;;抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国生化药物杂志;2006年06期

10 刘霄卉;斯日古楞;罗军荣;周建华;马学恩;;绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表达及其单克隆抗体的制备[J];中国预防兽医学报;2008年06期

相关会议论文 前10条

1 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

2 杨涛;朱筱娟;;抗酸性成纤维细胞生长因子单链抗体的构建及其活性研究[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年

3 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年

4 杨卫冲;焦新安;潘志明;张苏华;孙泉云;黄金林;;重组牛γ干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（下）[C];2005年

5 王香菊;徐秀兰;严红;蒯应松;陈艳;;抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体制备及其特性鉴定[A];第二次全国法医物证学学术交流会论文集[C];1998年

6 韩凌霞;陈雷;丁家波;刘岳龙;秦爱建;;MDV囊膜糖蛋白Ⅰ原核表达产物单克隆抗体的制备[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年

7 黄红亮;陈焕春;陈美玲;贝为成;严琳;;胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ基因3'-端的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集（下册）[C];2004年

8 王香菊;徐秀兰;严红;蒯应松;陈艳;;抗人免疫球蛋白IgG单克隆抗体制备及其特性鉴定[A];第二次全国法医物证学学术交流会论文集[C];1998年

9 杨肃文;张钧;周美霞;乐志安;谢鑫友;;尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定[A];2008年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2008年

10 倪宏波;姜海芳;周玉龙;王春仁;辛九庆;刘思国;宫大庆;钱爱东;;抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 贾超时邋李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年

2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年

3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年

4 本报特约撰稿人 李朝;单抗：生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年

5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年

6 记者 杨俊坚;单抗药物：站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年

7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年

8 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年

9 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年

10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年

相关博士学位论文 前10条

1 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年

2 韩凌霞;猪圆环病毒2型基因的原核表达与单克隆抗体的制备及感染性分子克隆的动物接种试验[D];中国农业科学院;2003年

3 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年

4 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

5 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年

6 赵宇军;猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因表达及其基因特异性噬菌体展示肽库构建[D];中国农业科学院;2005年

7 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年

8 李宝全;H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析[D];山东农业大学;2005年

9 徐海燕;人BAFF基因转染细胞及其单克隆抗体的生物学特性[D];苏州大学;2005年

10 郭莉;一个新的白细胞膜抗原ZCH-2B8a编码基因及其生物学特性的研究[D];浙江大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨卫冲;牛γ干扰素基因cDNA的克隆、表达及其表达产物单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2005年

2 李军;人Toll样受体-9的表达及其抗体制备[D];第一军医大学;2005年

3 侯强;猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的表达及其单克隆抗体的制备[D];中国农业科学院;2006年

4 刘进军;人巨噬细胞移动抑制因子的原核表达及其单克隆抗体的制备[D];第三军医大学;2005年

5 宁北芳;乙脑病毒和西尼罗病毒单克隆抗体的制备及鉴定[D];第二军医大学;2006年

6 王晓杜;猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D];华中农业大学;2007年

7 姜丽英;猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2008年

8 王政;抗GST标签蛋白单克隆抗体的制备及其活性鉴定[D];华中农业大学;2008年

9 杨利敏;应用核糖体展示技术对A型肉毒梭菌毒素保护性抗原表位的初步研究[D];内蒙古大学;2005年

10 沈芳;猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB和3ABC基因的表达与3AB单克隆抗体的制备[D];南京农业大学;2008年

，

本文编号：1326828