埃博拉病毒GP蛋白单克隆抗体的筛选和制备

发布时间：2017-12-25 03:07

本文关键词：埃博拉病毒GP蛋白单克隆抗体的筛选和制备　出处：《浙江大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景埃博拉病毒病是由埃博拉病毒感染引起的致死性出血热。1976年首次在扎伊尔和苏丹出现。截止2013年,共造成2387人发病,死亡1310例,病死率54.9%。2014年埃博拉病毒再次爆发,席卷西非,并跨越大洲,美国、英国、西班牙等相继发生埃博拉病例。截止2015年12月8日,共发病28634例,死亡11314例,病死率仍高达39.5%。从埃博拉首次爆发至今,已经过去了将近40年,目前国际上仍然没有特异的治疗手段和可供临床使用的疫苗。埃博拉病毒病已经成为国际性重大传染病。及时有效的诊断能早期发现埃博拉病人,对病人进行早期隔离,减少互相传播,能有效控制疾病的蔓延。埃博拉病毒病诊断依赖经典的定量PCR技术,但该方法需要一定的设备和技术人员,并不能适用于全部地区。快速、灵敏、简易的免疫学诊断能及早发现病人,控制传染源,对疫情防控至关重要,目前正缺乏这种免疫诊断产品。埃博拉病毒病目前仍然没有特效的治疗方法。GP是埃博拉病毒感染入侵的主要蛋白,也是诊断及治疗的主要靶蛋白。国际上针对GP蛋白已经研制出三种抗体混合的药物ZMapp,但是治疗效果仍然有限且不确切。因而埃博拉GP蛋白单克隆抗体的继续开发,为埃博拉病毒病治疗提供更多的备选抗体,就能大大地增大治疗埃博拉病毒病的可能性。目的1)筛选和制备高效价的埃博拉GP蛋白单克隆抗体2)验证单克隆抗体在ELISA, Western blot,细胞免疫荧光实验、细胞免疫化学实验中的应用。3)完成抗体的人源化方法设计靶肽,筛选抗体表位,人工合成埃博拉GP蛋白多肽。用多肽配合博奥龙公司生产的细胞因子佐剂免疫小鼠,通过5周的免疫法,制备免疫小鼠脾脏淋巴细胞,采用细胞融合技术,与SP20细胞融合,制备杂交瘤细胞。通过检测和筛选,对杂交瘤细胞进行克隆化。采用小鼠腹腔注射杂交瘤细胞制备埃博拉GP蛋白单克隆抗体,对抗体进行纯化和鉴定。完成单克隆抗体亚型鉴定,测序。完成抗体灵敏度和特异性检测。用来自军科院的表达GP蛋白的假病毒构建细胞模型。验证单克隆抗体在ELISA, Western blot,细胞免疫荧光实验、细胞免疫化学实验中的应用。通过基因工程技术,对埃博拉GP蛋白单克隆抗体完成人源化改造。结果1)筛选和制备了两株高效价的埃博拉GP蛋白单克隆抗体ZJEB8-01, ZJEDO-02.2) ZJEB8-01, ZJEDO-02检测埃博拉GP蛋白的灵敏度达到1：10000,该两个抗体能运用于ELISA, Western blot,细胞免疫荧光实验、细胞免疫化学实验。3) ZJEB8-01完成了人源化改造。结论筛选和制备了埃博拉GP蛋白单克隆抗体ZJEB8-01, ZJEDO-02。ZJEB8-01, ZJEDO-02检测埃博拉GP蛋白灵敏度达到1：10000。该两个抗体能运用于ELISA,Western blot.细胞免疫荧光实验、细胞免疫化学实验。ZJEB8-01人源化后,有望作为治疗埃博拉病毒病的备选抗体药物。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392

【参考文献】