淫羊藿苷对鱼藤酮诱导的大鼠脑线粒体损伤所致帕金森病模型的保护作用

发布时间：2018-01-01 00:09

  本文关键词：淫羊藿苷对鱼藤酮诱导的大鼠脑线粒体损伤所致帕金森病模型的保护作用　出处：《遵义医学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对鱼藤酮(rotenone,ROT)诱导的大鼠线粒体功能损伤的保护作用,并探讨其可能存在的保护机制。方法:100只体重在220-250 g的SD雄性大鼠随机分为空白组、ICA空白给药组、ROT(1 mg/kg/day)组、ICA低剂量组、ICA高剂量组。ROT采用背部皮下注射给药,ICA采用灌胃给药。具体为,ICA空白给药组采用灌胃30 mg/kg/day的ICA以及背部皮下注射0.2 m L/100 g溶媒(DMSO:生理盐水=1:1),连续5周;ROT组采用背部皮下注射ROT(1 mg/kg/day),同时灌胃0.5 m L/100 g的dd H2O,连续给药5周;ICA低剂量组和ICA高剂量组背部皮下注射ROT(1 mg/kg/day),同时分别灌胃ICA15和30 mg/kg/day,连续5周;空白组采用灌胃0.5 m L/100 g的dd H2O和背部皮下注射溶媒(DMSO:生理盐水=1:1)。动物给药结束后,检测行为学以及各类生化和分子生物学指标。(1)转棒实验检测行为学指标。(2)免疫组化酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)染色法检测ICA对ROT诱导的多巴胺(dopamine,DA)能神经元损伤的保护作用。(3)采用Oxygraph-2k线粒体呼吸功能仪,检测各组动物线粒体呼吸功能。(4)实时定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)法检测皮质PGC-1α、TFAM基因水平。(5)Western blot法检测大鼠皮质、纹状体中α-突触核蛋白(α-synuclein)的表达。(6)Western blot法检测大鼠皮质、纹状体中自噬相关蛋白:beclin-1、LC3-II、SQSTTM1/P62及自噬调控相关蛋白:m TOR、p-m TOR、P70 S6 Kinase、p-P70 S6 Kinase的表达。(7)采用PC12细胞株进一步研究ROT的细胞毒性及ICA的保护作用。细胞分为空白组、ROT(1μM)、ROT(1μM)+ICA(2μM)低剂量组、ROT(1μM)+ICA(4μM)高剂量组,共4组。(i)乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞毒性;(ii)Oxygraph-2k线粒体呼吸功能仪检测各组细胞线粒体呼吸功能的差异;(iii)Western blot法检测自噬相关蛋白:beclin-1、LC3-II、SQSTTM1/P62及自噬调控相关蛋白:m TOR、p-m TOR、P70 S6 Kinase、p-P70 S6 Kinase的表达。结果:动物实验结果(1)转棒实验结果显示:与空白组比较,ROT模型组转棒时间明显减少,给药ICA后显著提高转棒时间(P0.05)。(2)免疫组化染色表明,ROT导致DA能神经元数量减少,给药ICA低、高剂量后DA能神经元数量明显增加(P0.05)。(3)Oxygraph-2k线粒体呼吸功能结果显示:与空白组相比,ROT组线粒体呼吸功能明显下降(P0.05);与ROT模型组比较,ICA高剂量组线粒体呼吸功能显著提升(P0.05)。(4)RT-PCR结果显示:与空白组相比,ROT组PGC-1α和TFAM基因表达均显著下降。其中,给药ICA低、高剂量后,PGC-1α基因表达较ROT模型组均明显上调;给药ICA高剂量后,TFAM基因较ROT组明显升高。(5)Western blot结果显示:经ROT作用,大鼠皮质和纹状体中α-synuclein蛋白表达明显升高;ICA低、高剂量组与ROT模型比较,α-synuclein蛋白表达明显下调。进一步,ROT导致自噬及相关调控蛋白表达改变。结果显示,ROT导致皮质和纹状体中beclin-1和LC3-II蛋白表达水平下降,同时P62,p-m TOR,p-P70表达升高,表明自噬通路被抑制,而ICA给药明显激活LC3-II和beclin-1蛋白表达,同时降低P62,p-m TOR,p-P70蛋白水平,改善ROT诱导的自噬通路的抑制。细胞实验中,与空白组比较,ROT导致细胞内LDH释放显著升高,线粒体呼吸功能被抑制,自噬被抑制;与ROT组比较,ICA能显著降低LDH的释放,保护线粒体呼吸功能及改善自噬过程的抑制。结论:ICA保护线粒体功能,降低ROT诱导的神经毒性,其保护机制可能与ICA激活细胞自噬,提高α-synuclein蛋白降解以及促进受损线粒体的清除有关。
[Abstract]:鐩�鐨�:瑙傚療娣�缇婅椏鑻�(icariin,ICA)瀵归奔钘ら叜(rotenone,ROT)璇卞�肩殑澶ч紶绾跨矑浣撳姛鑳芥崯浼ょ殑淇濇姢浣滅敚�

本文编号：1362060