培元解郁方对急性应激抑郁模型的作用及TRP-KYN代谢的调节

发布时间：2018-01-01 01:13

本文关键词：培元解郁方对急性应激抑郁模型的作用及TRP-KYN代谢的调节　出处：《北京中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：抑郁症是一种以情绪低落、思维迟缓、意志活动减弱为主要特征的综合征。世界卫生组织公布的数据显示,预计抑郁症将在2020年成为第二大世界疾病负担源[1]。虽然已经有越来越多的抗抑郁药物被用于临床抑郁症的治疗,然而其疗效却并不十分理想。因此,从中医学中寻找治疗方法并研究其机制,是对抑郁症治疗的有效补充。培元解郁方来源于四逆散和天丝饮的合方,四逆散出自《伤寒论》,是一种经典的疏肝解郁祖方。四逆散抗抑郁作用的发挥可能与5-HT能神经元,促进神经营养、海马神经元发生等有关,天丝饮中,巴戟天的有效成分为巴戟天寡糖,具有很好的抗抑郁作用,疗效与氟西汀相似[2,3];菟丝子中含有金丝桃苷0.076%-0.102%,具有良好的抗抑郁作用。当前,越来越多的资料表明,各种应激因素能够激活TRP-KYN代谢途径,从而引起神经元可塑性相关活性物质的异常改变,导致抑郁症的发生,TRP-KYN的代谢紊乱是造成神经元可塑性变化的重要环节之一。本研究旨在以四逆散和天丝饮合方为载体,对合方调节TRP—KYN代谢途径以及对中枢神经元可塑性相关活性物质进行研究。1.培元解郁方对BALB/C小鼠急性应激模型的作用及TRP—KYN代谢途径的调节目的研究培元解郁方对色氨酸(TRP)—犬尿氨酸(KYN)代谢途径的调节及其抗抑郁的作用。方法将50只小鼠随机分为模型组、丙咪嗪组、天丝饮组、四逆散组、培元解郁组,采用强迫游泳的方法造成小鼠抑郁模型,各给药组均在强迫游泳4h时前灌胃给药,利用Noldus EthoVisionXT9系统记录小鼠强迫游泳不动时间,利用HPLC-MS/MS技术检测血清中TRP、KYN、皮质酮(Corticosterone,C)的含量,实时荧光定量PCR检测肝组织中色氨酸2,3-双加氧酶(Tryptophan 2,3-dioxygenaes,TDO)mRNA表达水平。结果急性应激可以导致小鼠不动时间延长,肝组织TD0活性增高,TDO mRNA表达增多。天丝饮、培元解郁方能够缩短小鼠FST的不动时间(p0.05),降低TDOmRNA的表达,天丝饮尚有明显的抑制喹啉酸(Quinolinic acid,QUIN)的作用。2.培元解郁方对急性氢化可的松诱导大鼠抑郁模型的抗抑郁作用及对TRP—KYN代谢的影响目的研究培元解郁方对色氨酸(TRP)—犬尿氨酸(KYN)代谢途径的调节及其抗抑郁的作用。方法将80只大鼠随机分为空白组、氟西汀组、模型组、天丝饮组、四逆散组、培元解郁低剂量组(0.435g/kg)、培元解郁中剂量组(0.87g/kg)、培元解郁高剂量组(1.74g/kg)。氢化可的松每日腹腔注射给药,天丝饮组、四逆散组、氟西汀组、培元解郁低、中、高剂量组持续给药21d后,采用旷场实验,观察大鼠探究活动;采用蔗糖偏好实验,观察大鼠对蔗糖的偏嗜;采用HPLC-MS/MS技术检测血清中TRP、KYN、QUIN、KYNA的含量,实时荧光定量PCR法分别检测肝脏TDO mRNA,脑组织海马和皮层中IDOmRNA的表达水平。结果各治疗组均能提高大鼠对蔗糖的偏嗜。氟西汀组、四逆散组、培元解郁方中、高剂量组均能提高大鼠探究活动。治疗各组对KYN/TRP比值有明显影响,天丝饮和培元解郁中剂量组能增加KYNA的含量;氟西汀组、天丝饮组和培元解郁中剂量组能够降低QUIN的含量。天丝饮能降低TDOmRNA的表达。氟西汀、天丝饮能降低IDO mRNA的表达。3.培元解郁方对急性氢化可的松诱导大鼠抑郁模型神经元可塑性的影响目的研究培元解郁方对氢化可的松诱导抑郁模型神经可塑性的影响。方法采用急性氢化可的松诱导抑郁大鼠模型,氢化可的松每日腹腔注射给药,氟西汀组、天丝饮组、四逆散组、培元解郁低、中、高剂量组持续灌胃给药21d后,实时荧光定量PCR分别检测脑组织海马和皮层中5-HT1A、CREB、BDNF、GR、NMDA、TrkBmRNA表达水平。结果海马结果显示,四逆散能够增加GR mRNA的表达;四逆散,培元解郁低、中、高剂量均能升高5-HT1A mRNA的表达,氟西汀能够显著降低NMDAR mRNA的表达,培元解郁低剂量组能够增加TrkBmRNA的表达,与模型组相比p0.05;皮层结果显示,氟西汀、培元解郁中、高剂量组均能够增加BDNF mRNA的表达,氟西汀、培元解郁低、中剂量能够显著增加5-HT1A mRNA的表达,而四逆散降低5-HT1A mRNA的表达,与模型组相比P0.05。4.培元解郁方对急性皮质酮诱导大鼠抑郁模型游离钙离子浓度的影响目的观察培元解郁方对皮质酮诱导抑郁模型游离钙离子的影响。方法将大鼠40只大鼠随机分为空白组、氟西汀组、模型组,天丝饮组,四逆散组,培元解郁组。皮质酮每日腹腔注射给药,天丝饮,四逆散,培元解郁方持续21d灌胃给药后,采用流式细胞技术检测大脑皮层神经细胞内游离钙离子浓度。结果模型组Ca2+浓度显著高于正常组,且有显著性差异(p0.05);天丝饮、四逆散、培元解郁方均能显著降低神经细胞内钙离子的浓度,抑制钙超载,有神经保护作用。结论:本实验表明,对于急性强迫游泳应激模型,天丝饮和培元解郁方均表现出一定的抗抑郁作用,机制与对抗应激引起的TD0活性增高有关,其中天丝饮在调节QUIN代谢方面有独特的作用。对于急性氢化可的松诱导抑郁大鼠模型,天丝饮、四逆散、培元解郁方均能表现出一定的抗抑郁作用,天丝饮作用机制与降低肝脏TDO、脑内IDO表达和活性,影响5-HT能神经系统,增加5-HT的含量有关;也与调节TRP-KYN的神经毒性、神经保护代谢产物作用有关。四逆散作用机制可能与降低体内ID0活性,升高5-HT1A的表达,从而增加5-HT神经元功能有关。四逆散升高海马中GR表达、降低皮层中5-HT1A表达的作用还有待研究。培元解郁方作用机制与降低血清皮质酮的含量,降低TDO、ID0表达与活性,增加5-HT1A表达,从而影响5-HT系统有关;其中培元解郁低剂量组显著增加TrkB的表达,培元解郁中、高剂量组显著增加BDNF的表达,在神经营养保护方面有独特的作用。对于皮质酮诱导抑郁大鼠模型,天丝饮、四逆散、培元解郁方均能对抗皮质酮引起的神经细胞内游离钙离子浓度增加,进而产生神经保护作用。
[Abstract]:Depression is a syndrome characterized by depression , slow thinking , and reduced will activity . The World Health Organization ' s data show that depression is expected to become the second largest source of disease burden in 2020 . In this study , 50 mice were randomly divided into three groups : model group , prochloraz group , Tianqi decoction group , Sini group and bacon dedepressive group . The results showed that the content of the mRNA in the hippocampus and cortex of rats could be increased by using the method of HPLC - MS / MS . In this experiment , 40 rats were randomly divided into two groups : blank group , fluoxetine group , model group , Tianqi decoction group , four - stress group , and Peiyuan group . The results showed that the concentration of calcium in nerve cells was significantly increased compared with the model group . The expression of 5 - HT1A was increased and the function of 5 - HT1A was increased , and the expression of 5 - HT1A in the cortex was decreased and the expression of 5 - HT1A in the cortex was decreased .

【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】