幽门螺杆菌HspA乳酸菌疫苗构建及免疫反应性鉴定
本文关键词：幽门螺杆菌HspA乳酸菌疫苗构建及免疫反应性鉴定 出处：《中国公共卫生》2013年07期 论文类型：期刊论文
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【摘要】：目的探讨幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中的克隆表达及免疫反应性。方法利用基因重组技术构建乳酸乳球菌重组子NZ3900/pNZ8110-hspA;绘制生长曲线,观察hs-pA插入对乳酸乳球菌重组子生长影响及乳酸链球菌素(Nisin)对重组子生长影响;采用钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测HspA在乳酸乳球菌中的表达;应用western-blot鉴定重组子表达HspA的免疫反应性。结果成功扩增出幽门螺杆菌河南分离株(MEL-Hp27)的hspA基因,构建了hspA基因的乳酸乳球菌原核表达系统(NICE);细菌生长曲线显示hspA的插入未对乳酸乳球菌重组子的生长产生影响,除10 ng/mL Nisin对重组子生长影响较小外,20～100 ng/mL nisin对重组子的生长均有明显抑制;SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE检测均未观察到HspA条带;western-blot鉴定结果显示乳酸乳球菌表达的HspA抗原蛋白具有良好免疫反应性。结论HspA在乳酸乳球菌中的少量表达影响重组菌生长。
[Abstract]:Objective to study the heat shock protein (HPA) of Helicobacter pylori (HP). Methods the recombinant NZ3900 / pNZ8110-hspA was constructed by gene recombination technique. The growth curve was drawn to observe the effect of hs-pA insertion on the growth of Lactococcus lactis recombinant and the effect of nisin on the growth of the recombinant. The expression of HspA in Lactococcus lactis was detected by sodium 12 alkyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Western-blot was used to identify the immunoreactivity of the recombinant HspA. Results the hspA gene of Helicobacter pylori Henan isolate (MEL-Hp27) was successfully amplified. The prokaryotic expression system of hspA gene for Lactococcus lactis was constructed. The bacterial growth curve showed that the insertion of hspA had no effect on the growth of Lactococcus lactis recombinant, except that 10 ng/mL Nisin had little effect on the growth of the recombinant. 20 ng/mL nisin significantly inhibited the growth of the recombinant plasmid. No HspA bands were observed by SDS-PAGE and Tricine SDS-PAGE. Western-blot analysis showed that the HspA antigen expressed by Lactococcus lactis had a good immunoreactivity. Conclusion A small amount of HspA expression in Lactococcus lactis affects the growth of recombinant bacteria.
【作者单位】： 河南科技大学医学院病原生物学教研室;郑州大学公共卫生学院流行病学教研室;郑州大学基础医学院寄生虫学教研室;
【基金】：中国博士后科学基金(200801273)
【分类号】：R392
【正文快照】： 乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)是一种革兰阳性食品级细菌,通常被认为是安全的,已经在乳制品发酵工业方面应用多年。原核表达系统(nisin-controlled expression,NICE)是目前最有效的食品级诱导表达系统,以乳酸链球菌素(nisin)作为诱导信号,已成功应用于多种菌株,包
【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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，本文编号：1368509
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