大黄炭对激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型的干预疗效及其机制研究

发布时间：2018-01-09 06:15

  本文关键词：大黄炭对激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型的干预疗效及其机制研究　出处：《上海交通大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:中药方剂在治疗年龄相关性黄斑变性(Age-relatedmaculardegeneration,AMD)中取得了良好的临床疗效。已经发明的一种中药方剂(专利号:WO2012079419)经过临床实验显示了其在治疗湿性AMD方面的积极作用,此项试验的目的在于揭示作为方剂成分之一的大黄炭(charred Radix et Rhizoma Rhei,CRRR)对于半导体倍频激光诱导的小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的治疗效果及其可能机制。方法:1、用半导体倍频激光照射C57BL/6小鼠,通过引起Bruch’s膜的破裂诱发CNV。2、将诱发了CNV的30只C57BL/6小鼠随机分为CRRR干预组(15只)和对照组(15只)。3、将CRRR干预组的小鼠给予CRRR的水溶液灌胃(浓度为0.6 g/100 ml;剂量为1 ml/0.1 kg;一天两次灌胃,共计21天)。4、将对照组的小鼠给予生理盐水灌胃(剂量为1 ml/0.1 kg;一天两次灌胃,共计21天)。3、将CRRR干预组和对照组的各5只小鼠在半导体倍频激光照射后第7天处死,收集视网膜组织采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)在mRNA水平的表达。4、将CRRR干预组和对照组的各5只小鼠在半导体倍频激光照射后第7天处死,收集视网膜组织采用western blot测定IL-10和VEGF的蛋白表达。5、在半导体倍频激光照射后的第14天和第21天分别将CRRR干预组和对照组的小鼠进行眼底荧光血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)检查,将造影图片进行分级以评估血管渗漏的程度。6、在半导体倍频激光照射后第22天,将CRRR干预组和对照组其余的小鼠处死,摘取眼球后制备视网膜铺片,进行三维共焦显微镜检查以评估CNV的体积。结果:1、在半导体倍频激光照射后的14天和21天,将FFA图片进行分级并比较,在将CRRR干预组和对照组中与临床相关的组织损害(2b级)的比较中没有发现有统计学意义的差异。2、在半导体倍频激光照射后第7天,qPCR显示CRRR干预组相对于对照组而言,IL-10在mRNA水平的表达显著增加,差异具有统计学意义,(P0.05)。3、在半导体倍频激光照射后第7天,Western blot显示CRRR干预组相对于对照组而言,IL-10的蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义,(P0.05)。4、在半导体倍频激光照射后7天,qPCR显示CRRR干预组相对于对照组而言,VEGF在mNA水平的表达没有显著增加,差异没有统计学意义,(P0.05)5、在半导体倍频激光照射后第7天,Western blot显示CRRR干预组相对于对照组而言,VEGF的蛋白表达没有显著增加,差异没有统计学意义,(P0.05)。6、在半导体倍频激光照射后22天,用共焦显微镜对视网膜铺片的CNV进行体积测定,在CRRR干预组和对照组的比较中没有发现有统计学意义的差异,(P0.05)。结论:1、CRRR干预组相对于对照组而言,IL-10在mRNA水平的表达和蛋白表达均显著增加。2、CRRR在此方剂中的作用是因为IL-10的抗炎症反应、免疫调节等一系列作用。3、CRRR在此方剂中的作用也可能是因为CRRR本身的止血作用以及和方剂中其他药物成分的协同作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R276.7;R-332

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本文编号：1400296