AT1a受体对雌雄小鼠肾脏钠氯共转运体（NCC）功能的影响

发布时间：2018-03-01 05:07

本文关键词： 钠氯共转运体血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ Ⅰ型受体氢钠交换体3 性别差异　出处：《成都医学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：钠氯共转运体(Sodium and chloride co-transporter,NCC)由SLC12A3基因编码,主要在肾脏远曲小管表达。NCC是肾脏远曲小管主要的钠离子重吸收通道,其活性的改变可直接影响机体的离子平衡和血压水平。研究提示,雌激素和血管紧张素Ⅱ均可提高NCC的功能,雌激素可通过上调肾脏NCC的表达及活性使NCC的功能出现性别差异。血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1)主要介导血管紧张素Ⅱ对NCC的调节作用,由于AT1受体在肾脏的表达存在性别差异,是否将导致血管紧张素Ⅱ的这一调节作用在性别间产生差异,以及AT1受体在其中发挥的作用尚不明确。血管紧张素Ⅱ同时也影响近端小管钠离子重吸收通道蛋白氢钠交换体3(Na/H Exchanger 3,NHE3)的表达,这一效应是否间接调节NCC的功能也不清楚。因此我们使用雄性及雌性野生型(AT1a~(+/+))和AT1a基因敲除型(AT1a~(-/-))小鼠研究AT1a受体对NCC活性及表达的影响,探讨AT1a受体在NCC功能的性别差异中发挥的作用;并通过对NHE3表达的检测,探讨AT1a受体是否也通过影响NHE3表达间接调节NCC的功能。目的研究雄性和雌性野生型及AT1a基因敲除小鼠NCC功能的活性及表达,探讨AT1a受体在NCC功能的性别差异中发挥的作用,并进一步研究可能的机制。材料与方法年龄相配的雄性及雌性AT1a~(+/+)和AT1a~(-/-)小鼠各1组,一共4组,每组6-8只。使用肾脏清除率实验检测NCC活性,比较各组小鼠在注射氢氯噻嗪前后的尿量,肾小球滤过率,总钠钾排量和钠钾排泄分数的变化,间接测量NCC的活性;使用q-PCR检测各组小鼠肾脏的NCC与NHE3的m RNA表达;使用Western-blotting检测各组小鼠肾脏的总NCC与磷酸化NCC蛋白及NHE3的蛋白表达。结果在AT1a~(+/+)小鼠中NCC的活性存在性别差异,注射氢氯噻嗪后,雄性和雌性小鼠的尿量、总钠排量、钠排泄分数、总钾排量的最大增高倍数分别为3.4-vs.7.8-,5.6-vs.11.7-,4.9-vs.7.9-和1.4-vs.3.1-倍,雌性高于雄性(P0.05,n=6)。AT1a~(-/-)小鼠的NCC活性没有性别差异,注射氢氯噻嗪后,雄性和雌性小鼠的尿量、总钠排量、钠排泄分数、总钾排量及钾排泄分数的最大增高倍数分别为7.5-vs.9.4-,11.0-vs.10.0-,9.5-vs.7.8-,4.2-vs.3.8-和4.0-vs.3.0-倍,雌性与雄性的差异无统计学意义(P0.05,n=6)。q-PCR检测NCC的mRNA表达在AT1a~(+/+)和AT1a~(-/-)小鼠中均有性别差异,雌性高于雄性(P0.05,n=4);NHE3的mRNA表达在雄性与雌性的AT1a~(+/+)和AT1a~(-/-)小鼠中均无统计学差异(P0.05,n=4)。Western-blotting检测NCC的膜蛋白表达在AT1a~(+/+)小鼠中存在性别差异,雌性小鼠的NCC膜总蛋白与磷酸化蛋白分别是雄性的1.7和4.6倍(P0.05,n=3);而在AT1a~(-/-)小鼠中,膜总蛋白与磷酸化蛋白表达均无性别差异(P0.05,n=3)。雄性AT1a~(-/-)小鼠的膜总蛋白与磷酸化蛋白表达是AT1a~(+/+)雄性小鼠的2.2和6.2倍(P0.05,n=3),而雌性AT1a~(-/-)小鼠的膜总蛋白与磷酸化蛋白表达与AT1a~(+/+)雌性小鼠无统计学差异(P0.05,n=3)。NHE3的膜蛋白表达在AT1a~(+/+)小鼠中无性别差异(P0.05,n=3),但其表达在雄性与雌性AT1a~(-/-)小鼠中均显著下降,雄性小鼠的NHE3的膜蛋白表达在AT1a~(-/-)小鼠比AT1a~(+/+)下降了61%,而雌性为46%,但雄性和雌性的下降幅度(61%vs.46%)在性别间无统计学意义差异(P0.05,n=3)。结论1.在AT1a~(+/+)小鼠中,NCC的mRNA和膜蛋白表达及活性均有性别差异,雌性高于雄性。2.在AT1a~(-/-)小鼠中,NCC的膜蛋白表达和活性在AT1a~(-/-)小鼠中无性别差异,AT1a受体在膜蛋白水平调节NCC的的功能,进而影响其活性。3.雄性AT1a~(-/-)小鼠NCC的膜蛋白表达和活性的增加或与NHE3的膜蛋白表达下降有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R363

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