从突触可塑性角度探究推拿改善SNI模型大鼠运动功能的机理

发布时间：2018-03-01 14:21

  本文关键词： 突触蛋白Ⅰ 组织型纤溶酶原激活物 神经肌肉接头 推拿 坐骨神经损伤　出处：《北京中医药大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[目的] 观察推拿治疗对坐骨神经损伤大鼠行为学的改变,探索突触蛋白Ⅰ(Synapsin Ⅰ)、纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制剂(PAI-1)、乙酰胆碱受体(nAChR)与相关诱导因子分别在脊髓、坐骨神经损伤点远端与神经肌肉接头(NMJ)中表达的变化,从突触可塑性角度探究推拿对周围神经损伤运动功能影响的机理。[方法] 将成年雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组及推拿组。选用坐骨神经神经夹持损伤模型对模型组、模型对照组与推拿组大鼠实施手术造模。行为学以SFI与BBB评分考察运动功能恢复情况；通过实时荧光定量、免疫印迹法、免疫组织化学法与酶联免疫吸附法检测脊髓腹角、损伤点远端与NMJ中相关指标的表达情况,分析造模手术与推拿治疗对各指标的影响。[结果]1行为学SFI：造模三组大鼠在造模后7d的SFI显著低于正常组(p0.05),表明造模成功。治疗5次后,模型组、模型对照组与推拿组的SFI均显著低于正常组(p0.05)。推拿组大鼠SFI较模型组、模型对照组有所升高,但不具有统计学意义(p0.05)。治疗10次后,造模的三组大鼠评分均低于正常组,有显著差异(p0.05),推拿组SFI均值较模型组出现显著上升(p0.05)。治疗15次后,造模的三组大鼠评分均低于正常组,有显著差异(p0.05)；推拿组的结果与治疗10次后结果相近,高于模型组、模型对照组(p0.05),低于正常组(p0.05)。在10-20次治疗过程中,模型组与模型对照组的SFI评分有上升趋势。治疗20次后,推拿组SFI显著高于模型组(p0.05),低于正常组但无统计学差异(p0.05)。BBB评分：造模三组大鼠术后7d的BBB结果与正常组相比显著降低(p0.05),提示模型制作成功。治疗5次后,造模三组BBB评分均显著低于正常组(p0.05)。推拿组大鼠BBB结果较模型组、模型对照组有所升高,不具有统计学意义(p0.05)。治疗10次后,造模三组的结果均显著低于正常组(p0.05),推拿组BBB均值较模型组出现显著上升(p0.05)。治疗15次后,造模三组的评分低于正常组(p0.05),略有上升；推拿组的BBB评分显著高于模型组(p0.05)。治疗20次后,模型组与模型对照组的评分上升,但与正常组存在差异(p0.05)；推拿组BBB评分上升至19.13±1.36,显著高于模型组(p0.05),低于正常组(p0.05)。行为学结果共同表明20次推拿治疗量累积可明显改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,但未使受损神经恢复至正常。2 Synapsin Ⅰ转录与p-Synapsin Ⅰ蛋白表达造模大鼠术后7d的Synapsin I转录、p-Synapsin I蛋白表达与正常组相比显著降低(p0.05)。治疗20次后,推拿组Synapsin Ⅰ转录显著高于模型组(p0.05),也高于正常组,但没有统计学意义(p0.05)；同时推拿组p-SynapsinⅠ蛋白表达显著高于模型组(p0.05)、低于正常组(p0.05)。结果表明推拿干预提高脊髓腹角Synapsin Ⅰ基因转录及其磷酸化蛋白的表达,促进运动神经元的神经递质释放。3 tPA与PAI-1的蛋白表达造模后7d模型组大鼠损伤点远端的tPA、PAI-1平均积分光密度高于正常组(p0.05)；治疗20次后模型组、模型对照组tPA平均积分光密度值有下降趋势,仍高于正常组(p0.05),而PAI-1平均积分光密度值继续升高,显著高于正常组(p0.05)。经过20次推拿治疗后,推拿组tPA与PAI-1表达均显著低于模型组(p0.05),略高于正常组,无统计学意义(p0.05)。结果显示推拿治疗缩短tPA与PAI-1在细胞外基质中高表达的病理过程,加快纤维蛋白沉积的溶解,为突触重塑创造良好微环境。4 NMJ受体与神经诱导因子的转录与蛋白表达与正常组相比,造模后7d模型组大鼠γ-nAChR mRNA转录显著增强(p0.05),ε-nAChR mRNA转录水平下降(p0.05)；治疗20次后,模型组与模型对照组γ-nAChR mRNA保持平稳、ε-nAChR mRNA的表达升高,低于正常组(p0.05)。推拿组γ-nAChR mRNA转录低于模型组(p0.05), ε-nAChR mRNA转录高于模型组(p0.05)。造模后7d模型组大鼠Agrin、MuSK基因转录与MuSK蛋白表达低于正常组(p0.05)。治疗20次后,模型组、模型对照组Agrin与MuSK基因转录、MuSK蛋白表达低于正常组(p0.05)；推拿组Agrin与MuSK基因转录显著高于模型组(p0.05)、低于正常组(p0.05),MuSK蛋白表达显著高于模型组与正常组(p0.05)。结果共同表明推拿提高Agrin与MuSK基因转录与MuSK蛋白表达水平,对γ-ε亚基转换发挥积极作用,促进失神经支配肌肉的再支配。[结论]1推拿可以显著改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能。2推拿增强坐骨神经损伤大鼠脊髓中Synapsin Ⅰ基因的转录与p-Synapsin Ⅰ蛋白的表达,进而加强脊髓中运动神经元与靶器官建立联系。3推拿调节损伤点远端tPA与PAI-1的稳态,维持微环境修复能力趋近正常状态,预防和解除胶原纤维形成结缔组织瘢痕,为突触重塑提供良好的微环境。4推拿对Agrin/MuSK信号通路中诱导因子表达的升高可能进一步促进NMJ发育中γ-ε的亚基置换,促进失神经肌肉的再支配,提高突触的传递效率。
[Abstract]:[Objective] to observe the massage treatment of sciatic nerve injury rat behavior change, explore the synaptic protein I (Synapsin I), plasminogen activator (tPA) and its inhibitor (PAI-1), acetylcholine receptor (nAChR) and the related factors were induced in spinal cord injury of sciatic nerve distal and neuromuscular junction (NMJ) the changes of expression mechanism.] method to explore the effect of massage on sports injury of peripheral nerve function from the angle of synaptic plasticity in adult male SD rats were randomly divided into normal group, sham operation group, model group, control group and model group. The push with sciatic nerve clamping injury model in the model group, model the control group and massage group rats operation model. The behavior in SFI and BBB scores of motor function recovery; through real time PCR, immunoblotting, immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of spinal cord 鑵硅��,鎹熶激鐐硅繙绔�涓嶯MJ涓�鐩稿叧鎸囨爣鐨勮〃杈炬儏鍐�,鍒嗘瀽閫犳ā鎵嬫湳涓庢帹鎷挎不鐤楀�瑰悇鎸囨爣鐨勫奖鍝�.[缁撴灉]1琛屼负瀛�SFI锛氶，

本文编号：1552311