多基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞

发布时间：2018-03-14 03:19

  本文选题：诱导多潜能干细胞　切入点：胰岛素分泌细胞　出处：《第二军医大学学报》2013年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程的iPS细胞。以重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合感染小鼠iPS细胞,体外培养后以RT-PCR检测胰岛B细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;ELISA检测不同糖浓度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰岛素的分泌量。结果起源于MEFs的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织,显示MEFs被成功地重编程为iPS细胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛类B细胞,RT-PCR结果显示其胰岛B细胞功能基因的表达与小鼠胰岛B细胞株MIN6相似。免疫荧光检测可见胰岛类B细胞内有胰岛素表达。ELISA检测结果显示胰岛类B细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。结论胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用,使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。
[Abstract]:Objective to observe the effects of pancreatic duodenal homeobox protein 1 (PDX-1), neurodifferentiation factor 1 neuroD1 (NDF 1) and oncogene congener Agna MafA (a gene congener of fibrosarcoma tendonitis) on the differentiation of mouse multipotent stem cell (IPS cells) into insulin. Methods the recombinant adenovirus Ad-mPDX-1-IRES-GFP-Ad-mNeuroD1-IRES-GFP-Ad-mMafA-IRES-GFP was used to co-infect mouse iPS cells. After culture in vitro, the functional gene expression of islet B cells was detected by RT-PCR. The expression of insulin protein was detected by immunofluorescence and the secretion of insulin was detected by Elisa under different glucose concentrations. The results showed that iPS cells derived from MEFs could form compact clones with edge light. The dry gene Nanogan Rex-1 + SSEA-1 is expressed and can differentiate into tridermal tissue in vivo and in vitro. The results showed that MEFs was successfully reprogrammed as iPS cell. Ad-mNeuroD-IRES-GFP Ad-mMafA-IRES-GFP infected mouse iPS cells could differentiate into islet B cells. RT-PCR results showed that the expression of islet B cell functional genes was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. Immunofluorescence assay showed that the expression of islet B cell functional gene was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. The results of insulin expression and Elisa showed that islet B cells were more responsive to glucose at different concentrations. Conclusion PDX-1 neuroD1 and MafA can play a synergistic role in the expression of insulin in pancreatic islet B cells. Mouse iPS cells were differentiated into insulin secretory cells with significant insulin synthesis and secretion ability.
【作者单位】： 苏州大学附属第一医院普通外科;南通大学附属医院普通外科;
【基金】：国家自然科学基金(81101615,81070656) 中国博士后基金(2012M521107) 江苏省自然科学基金(BK2010276)~~
【分类号】：R329.2

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