微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应

发布时间：2018-03-15 08:10

  本文选题：微小RNA-　切入点：钙结合蛋白　出处：《中国修复重建外科杂志》2013年09期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨微小RNA-451(micro RNA-451,miRNA-451)靶向调节钙结合蛋白39(calcium binding protein 39,CAB39)表达,促进MSCs向成骨细胞分化的效应。方法选择pMIR-report质粒及pRL-TK质粒,通过双荧光素酶基因报告系统,鉴定CAB39是否为miRNA-451的靶基因。将pre-miRNA-451(A组)及anti-miRNA-451(C组)分别转染到C3H10T1/2细胞中,同时设置相应的pre-miRNA阴性对照组(B组)和anti-miRNA阴性对照组(D组);成骨诱导培养7、14 d,采用实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP mRNA相对表达量;诱导培养14 d,采用Western blot检测细胞中CAB39蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况。结果经鉴定,CAB39是miRNA-451的靶基因。实时荧光定量PCR检测示,成骨诱导培养7、14 d,A组Runx2、ALP mRNA相对表达量显著高于B组,C组显著低于D组,差异均有统计学意义(P0.05)。成骨诱导培养14 d,Western blot检测示A组CAB39蛋白表达量为0.55±0.05,较B组1.00±0.07明显降低;而C组为1.21±0.05,较D组1.00±0.04明显增高;差异均有统计学意义(P0.05)。茜素红染色示A组细胞外钙基质沉积较B组明显增多,而C组细胞外钙基质沉积较D组明显减少。结论 miRNA-451可通过抑制CAB39表达,促进MSCs成骨分化。
[Abstract]:Objective to study the effect of RNA-451 (micro RNA-451 miRNA-451) targeting the regulation of calcium binding protein 39 (calcium binding 39 protein, CAB39) expression, MSCs effect to promote osteoblast differentiation. Methods pMIR-report plasmid and pRL-TK plasmid by dual luciferase reporter gene system, determine whether CAB39 is the target gene of miRNA-451. (pre-miRNA-451 A) and anti-miRNA-451 group (group C) were transfected into C3H10T1/2 cells, and set the corresponding pre-miRNA negative control group (B group) and anti-miRNA control group (group D); osteoblast induced 7,14 d by real-time fluorescence quantitative PCR detection of osteogenic markers Runx2, relative expression of ALP induced by mRNA; cultured for 14 d, the expression of CAB39 Western blot were detected by alizarin red staining, extracellular matrix deposition of calcium. The results identified, CAB39 is the target gene of miRNA-451. Real time fluorescent quantitative PCR detection In osteogenic medium 7,14 D, A Runx2 group, ALP mRNA expression was significantly higher than that of B group, C group was significantly lower than that of D group, the differences were statistically significant (P0.05). Osteoblasts cultured for 14 d, Western blot showed the expression of CAB39 protein in A group was 0.55 + 0.05, compared with 1 in group B + 0.07 significantly decreased; while the C group is 1.21 + 0.05, 1 + 0.04 than in D group increased significantly; the differences were statistically significant (P0.05). Alizarin red staining showed extracellular matrix deposition of calcium in A group increased significantly than in group B and group C, extracellular matrix deposition of calcium was significantly reduced compared with D group. Conclusion miRNA-451 by inhibiting the expression of CAB39, promote the osteogenic differentiation of MSCs.

【作者单位】： 第三军医大学解剖学教研室生物力学实验室;解放军成都军区总医院骨科;
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2011CB964701) 国家自然科学基金资助项目(30872636、81271980)~~
【分类号】：R329

【共引文献】

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