IL-17A对系统性硬化病小鼠模型皮肤和肺部纤维化病变的作用

发布时间：2018-03-20 03:15

  本文选题：系统性硬化病　切入点：白细胞介素17A　出处：《广西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分抗IL-17A单克隆抗体对系统性硬化病小鼠模型皮肤和肺部纤维化病变的作用目的:研究白细胞介素(IL)-17A在系统性硬化病(SSc)小鼠模型皮肤和肺组织中的表达,并探讨抗IL-17A单克隆抗体对SSc小鼠模型纤维化病变的作用。方法:将24只雌性BALB/c小鼠随机分为4组,每组6只,包括正常对照组(小鼠背部皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS))、模型组(小鼠背部皮下注射博来霉素(BLM))、抗体组(BLM+抗IL-17A单克隆抗体)、同型对照组(BLM+同型对照)。观察各组小鼠皮肤、肺脏的病理变化,计算皮肤、肺脏炎症评分及纤维化评分,免疫组化法检测小鼠皮肤和肺组织IL-17A细胞因子的表达,荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠皮肤及肺脏IL-17A、转化生长因子(TGF)-β_1、I型胶原m RNA的表达。结果:1、抗体组小鼠皮肤厚度(61.08±5.68μm)、皮肤炎症评分(2.47±0.15)明显低于模型组(84.43±6.19μm、2.83±0.24)及同型对照组(83.21±5.72μm、2.85±0.19)(P0.05)。2、抗体组小鼠肺脏纤维化、炎症评分(2.53±0.18、1.87±0.12)低于模型组(3.07±0.24、2.83±0.24)及同型对照组(3.03±0.29、2.28±0.16)(P0.05)。3、免疫组化测定小鼠皮肤IL-17A细胞因子的表达,抗体组的积分光密度(IOD)值(4.74±1.50)高于正常对照组(1.32±0.85)而低于模型组(9.95±3.06)和同型对照组(10.02±2.00)(P0.05)。4、免疫组化测定小鼠肺脏IL-17A细胞因子的表达,抗体组的IOD值(36.64±9.45)高于正常对照组(17.77±9.76)而低于模型组(59.53±15.40)和同型对照组(61.46±16.91)(P0.05)。5、抗体组小鼠皮肤中IL-17A(3.00±1.20)、TGF-β_1(3.20±1.27)、I型胶原(3.30±0.88)m RNA的表达量低于模型组(6.00±2.19、5.73±2.29、5.70±2.25)和同型对照组(5.98±2.50、5.25±1.75、5.27±2.12)(P0.05)。6、抗体组小鼠肺脏中IL-17A(1.57±0.39)、TGF-β_1(1.83±0.75)、I型胶原(1.50±0.58)m RNA的表达量低于模型组(2.44±0.55、3.04±0.84、2.40±0.73)和同型对照组(2.43±1.09、2.91±1.0、2.32±0.85)(P0.05)。7、免疫组化检测小鼠皮肤IL-17A细胞因子的表达量与皮肤炎症评分、皮肤厚度、皮肤TGF-β_1、I型胶原m RNA的表达量密切正相关。8、免疫组化检测小鼠肺组织IL-17A细胞因子的表达量与肺部炎症、纤维化评分、肺组织的TGF-β_1、I型胶原m RNA的表达量密切正相关。结论:1、IL-17A在SSc小鼠模型皮肤和肺组织中表达增高,IL-17A水平与SSc炎症和纤维化程度呈正相关。2、IL-17A与TGF-β_1可能共同作用参与了SSc的发病,阻断IL-17A可抑制TGF-β_1、I型胶原m RNA的表达,从而减少SSc的炎症及纤维化病变。第二部分体外IL-17A对系统性硬化病小鼠模型肺成纤维细胞分泌功能的影响目的:观察IL-17A及其单克隆抗体对SSc小鼠模型肺成纤维细胞(FB)分泌功能的影响,进一步探讨IL-17A在SSc纤维化形成中的作用。方法:选用SSc小鼠模型肺组织进行原代培养FB,通过倒置显微镜观察形态,将培养的FB分为3组:对照组(FB+DMEM培养基)、刺激组(FB+IL-17A)、阻断组(FB+抗IL-17A单克隆抗体),培养48小时,用RT-PCR检测各组细胞I型胶原、TGF-β_1 m RNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养液上清IL-6、TGF-β_1的水平。结果:1、培养的肺组织块紧密贴壁,倒置显微镜下观察组织块为暗黑色遮光区域,4-6天可见周围有以梭形细胞游出,逐渐密集,11-20天细胞可传代。2、阻断组细胞TGF-β_1(18.73±5.52)、I型胶原(342.66±78.39)m RNA表达量低于刺激组(57.17±12.40、556.52±116.04)(P0.05),而高于对照组(3.53±0.94、216.49±18.33)(P0.05)。3、阻断组细胞培养上清液IL-6和TGF-β_1的水平(3009.13±198.76pg/ml、292.56±54.20pg/ml)低于刺激组(3812.54±92.03pg/ml、527.38±41.00pg/ml)(P0.05),而高于对照组(2561.28±283.70pg/ml、217.05±55.08pg/ml)(P0.05)。结论:1、IL-17A可促进SSc小鼠模型肺FB TGF-β_1、I型胶原m RNA的表达,IL-6和TGF-β_1的分泌。2、阻断IL-17A可抑制FB I型胶原的产生,IL-6和TGF-β_1的分泌进而抑制SSc小鼠皮肤及肺脏的纤维化病变。
[Abstract]:The first part of the role of anti IL-17A monoclonal antibody on mice model of systemic sclerosis skin and lung fibrosis Objective: To study the effects of interleukin (IL) -17A in systemic sclerosis (SSc) expression in mouse model of skin and lung tissues, and to investigate the anti IL-17A monoclonal antibody on SSc mice model of fibrosis lesions. Methods: 24 female BALB/c mice were randomly divided into 4 groups, 6 rats in each group, including control group (subcutaneous injection of phosphate buffer (PBS)), model group (subcutaneous injection of bleomycin (BLM) group (BLM+) antibody, anti IL-17A monoclonal antibody, the same type) the control group (BLM+ control). To observe the skin of mice, the pathological changes of lung, calculation of skin, lung inflammation and fibrosis score score, immunohistochemistry was used to detect the expression of skin and lung tissue of mice IL-17A cell factor, fluorescence quantitative PCR detection (RT-PCR) 灏忛紶鐨�鑲ゅ強鑲鸿剰IL-17A,杞�鍖栫敓闀垮洜瀛�(TGF)-尾_1,I鍨嬭兌鍘焟 RNA鐨勮〃杈，

本文编号：1637263