4周龄幼龄大鼠环磷酰胺免疫抑制模型的建立及应用

发布时间：2018-03-31 07:13

本文选题：幼龄大鼠　切入点：免疫抑制　出处：《中国农业大学》2017年博士论文

【摘要】：由于幼龄个体与成年个体在药物代谢和药效方面不完全一致,使用成年动物模型获得的数据不足以支持幼龄个体用药评价。如今各国药物监管机构均推荐使用幼龄动物模型来研究和评价低年龄个体用药。为缓解幼龄动物模型的匮乏,本研究预期建立一个4周龄幼龄大鼠环磷酰胺免疫抑制模型,用于支持幼龄个体免疫调节药物开发评价工作。研究采用血液学、流式细胞学、免疫组织化学、组织病理学、Western Blot和RT-PCR等技术方法,首先根据模型大鼠临床表现、外周血细胞计数和胸腺系数变化探索建模条件。其次,通过对体重、外周血细胞数量、淋巴细胞亚群、免疫器官(脾脏、胸腺和淋巴结)、脾脏中CDKN1A因子蛋白表达量和基因相对表达量、肠道黏膜免疫指标等检测结果变化的分析,总结模型大鼠免疫指标的变化并与成年大鼠比较免疫变化的区别。最后,通过阳性药对模型进行验证和应用。研究获得以下结果:通过体重、外周血细胞计数和胸腺脏器系数三项指标筛选建模条件,确认环磷酰胺灌胃30 mg/kg隔日共2次为最佳建模条件。幼龄大鼠表现出明显免疫抑制和体重降低,且未见幼鼠死亡和其他严重副反应。免疫抑制模型建立后,CYP模型组4周龄幼龄大鼠与对照组相比,临床表现正常;生长发育显著抑制;外周血细胞数量如白细胞总数、嗜中性粒细胞和淋巴细胞数显著降低;淋巴细胞各亚型均严重抑制,其中B淋巴细胞降低比例最高;CDKN1A因子上调;胸腺、骨髓均表现显著抑制;肠道黏膜免疫方面,肠道sIgA分泌减少、派氏结数量降低、上皮内淋巴细胞数量减少、杯状细胞数量明显降低;变化差异具有统计学意义且几乎未见副作用。与成年大鼠相比较,免疫相关指标总体降速快且幅度大,恢复慢且程度低。使用G-CSF和匹多莫德作为阳性药对模型进行应用和验证。G-CSF给药组体重较模型组升高;表现出包括嗜中性粒细胞数和单核细胞等显著的粒细胞提升作用;显著提升脾脏脏器系数,增加派氏结数量;表现极强的NK细胞提升作用;降低CDKN1A基因表达量;对淋巴细胞促进作用有限。匹多莫德给药组体重较模型组升高;全面提升白细胞数量;对T、B、NK均有促进作用,且对NK细胞促进作用明显;CDKN1A基因表达量降低。模型通过验证,可以正确反应出G-CSF和匹多莫德免疫增强作用并与文献报道相符。本研究首次使用4周龄SD大鼠成功建立环磷酰胺诱导的免疫抑制幼龄动物模型。在幼龄大鼠中发现环磷酰胺同样通过上调细胞周期因子CDKN1A影响细胞周期、终止免疫系统细胞增值而引起免疫抑制的机制。研究中较系统的观察了机体固有免疫和获得性免疫的免疫抑制表现以及恢复情况。在同剂量条件下与成年大鼠相比较,幼龄大鼠免疫抑制程度强,恢复能力弱。最后初步系统评价模型大鼠肠道黏膜免疫结构及功能的变化,为黏膜免疫调节剂的研究提供支持。通过本研究,我们建立一个适用于幼龄个体免疫调节药物评价的幼龄大鼠环磷酰胺免疫抑制模型。
[Abstract]:In order to alleviate the deficiency of juvenile animal models , it is expected to establish a 4 - week - old rat model of cyclophosphamide immunosuppression to study and evaluate the immune changes of young rats . In this study , we established a model of cyclophosphamide - induced immunosuppression in young rats .

【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R-332;R965

【参考文献】