重组金黄色葡萄球菌肠毒素A的表达及鉴定

发布时间：2018-04-24 00:15

  本文选题：重组金黄色葡萄球菌肠毒素 + A　； 参考：《卫生研究》2013年06期

【摘要】：目的通过基因重组方式获得高纯度、高含量重组金黄色葡萄球菌肠毒素A(rSEA)。方法将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因片段插入pET28a载体中,测序并正确鉴定后,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白。重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化。结果 SDS-PAGE结果表明成功表达了分子量约为30 kD的重组蛋白,经Western blot和小鼠生物学鉴定,表达产物为重组金黄色葡萄球菌肠毒素A,并且具有较好的免疫原性,为制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体及建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建的rSEA表达载体稳定,可高效表达目的 rSEA蛋白。
[Abstract]:Objective to obtain high purity and high content recombinant staphylococcus aureus enterotoxin A rSEAA by gene recombination. Methods Staphylococcus aureus enterotoxin Agna gene fragment was inserted into pET28a vector, sequenced and correctly identified. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21DE3) and induced by IPTG to express the target protein. The recombinant protein was purified by Ni-NTA His protein affinity column. Results SDS-PAGE showed that the recombinant protein with molecular weight of about 30 KD was successfully expressed. The recombinant staphylococcus aureus enterotoxin A was identified by Western blot and mouse biology, and had good immunogenicity. It lays a foundation for the preparation of monoclonal antibodies against Staphylococcus aureus enterotoxin A and the establishment of corresponding immunological detection methods. Conclusion the constructed rSEA expression vector is stable and can efficiently express the target rSEA protein.
【作者单位】： 国家食品安全风险评估中心卫生部食品安全风险评估重点实验室;青岛大学医学院流行病与卫生统计教研室;
【分类号】：R378

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本文编号：1794273