PLCε在日本血吸虫尾蚴性皮炎中的作用机制研究

发布时间：2018-05-28 08:33

  本文选题：尾蚴性皮炎 + 血吸虫　； 参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探究磷脂酶Cε(PLCε)在日本血吸虫(SJ)尾蚴性皮炎中的作用及其机制。方法:用日本血吸虫尾蚴感染PLCε野生型(WT)与PLCε敲除型(KO)两基因型小鼠,分别建立Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应模型。在感染后不同时间点获取小鼠皮肤组织,每基因型不同时间点分别有3只小鼠。将获取的小鼠皮肤组织分成3份,分别从组织病理学、分子生物学和免疫学三个方面进行分析。1.进行石蜡包埋,制作石蜡切片,进行苏木素伊红(HE)染色,分析皮肤组织病理变化,并拍照记录。2.提取总RNA,并进行反转录,用qRT-PCR的方法检测相关细胞因子mRNA表达水平。3.用O.C.T包埋,制作冰冻切片进行免疫荧光染色,探究炎症因子表达位置及表达量。结果:1.HE染色结果显示,在Ⅰ型尾蚴性皮炎模型中PLCεKO与WT组小鼠皮肤炎症反应无显著性差异,两基因型小鼠皮肤组织肥厚度以及炎性细胞数量表现出相同的变化趋势,炎细胞数量在12h达到高峰,之后有下降趋势。PLCεWT与KO两基因型之间差异不明显(均P0.05)。2.在Ⅳ型尾蚴性皮炎模型中,PLCεKO小鼠与WT小鼠皮肤肥厚度和炎细胞数量都表现出相同的变化趋势,皮肤厚度随感染时间延长呈增厚趋势,PLCε基因敲除后,皮肤厚度显著受到抑制(t48h=5.317,P=0.000;t72h=10.162,P=0.000),在48 h,炎性细胞浸润明显减弱(t48h=2.888,P=0.020)。3.qRT-PCR检测相关细胞因子mRNA表达水平结果显示,成纤维细胞、角质细胞等非免疫细胞所分泌的细胞因子IL-1α,IL-1β,趋化因子Cxcl-1,Cxcl-2mRNA的表达在KO组明显受到抑制(IL-1α:t12h=4.785,P=0.000;t24h=2.109,P=0.046;IL-1β:t6h=3.187,P=0.004;t12h=5.049,P=0.000;Cxcl-1:t12h=4.858,P=0.000;Cxcl-2:t24h=7.957,P=0.000)。而T细胞衍生因子IL-4,IFNg,IL-17等以及IL-23 mRNA的表达量表现出升高的趋势,但是在WT与KO组间无显著性差异(IL-4:t24h=0.496,P=0.625;IFNg:t24h=-0.035,P=0.973;IL-17:t24h=0.112,P=0.938;IL-23:t24h=-1.151,P=0.261)。4.早期炎症细胞因子IL-1α,IL-1β免疫荧光染色结果显示,IL-1α表达在表皮及真皮位置,IL-1β主要表达在表皮位置,并且WT两种炎症因子蛋白的表达量相对KO组较高。结论:1.PLCε不影响速发型尾蚴性皮炎;2.PLCε影响迟发型尾蚴性皮炎;3.PLCε下调促炎因子(40)L-1α,IL-1β以及趋化因子Cxcl-1,Cxcl-2等非免疫细胞分泌的细胞因子mRNA的表达抑制了迟发型尾蚴性皮炎。
[Abstract]:Objective: to investigate the role and mechanism of phospholipase C 蔚 -PLC 蔚 in cercaritic dermatitis of Schistosoma japonicum. Methods: two genotypes of Schistosoma japonicum cercariae infected with PLC 蔚 wild type (WTT) and PLC 蔚 knockout type (KO) were used to establish type 鈪，

本文编号：1946021