肝细胞靶向性Gal-Bu对大鼠肝细胞的转染效率检测

发布时间：2018-08-13 15:02

【摘要】：目的检测肝细胞靶向性半乳糖基化聚乙烯亚胺衍生物Gal-Bu对大鼠肝细胞(BRL-3A)的转染效率。方法对PEI-Bu化学修饰以半乳糖基团制备Gal-Bu,琼脂糖凝胶电泳检测其复合质粒DNA的能力;MTT法检测Gal-Bu对BRL-3A的细胞毒性;以荧光素酶质粒作为报告基因,测定Gal-Bu在BRL-3A细胞的转染效率;半乳糖竞争抑制实验观察Gal-Bu对肝细胞的靶向性。结果琼脂糖凝胶电泳表明在质量比15时,Gal-Bu具有复合DNA的能力。在5～100μg/mL浓度范围内,Gal-Bu和PEI 25 000的细胞毒性随浓度升高而增大;在同一浓度下,Gal-Bu的细胞毒性小于PEI 25 000(P0.01)。Gal-Bu/DNA在质量比为50时达到最高转染活性,其数值为PEI 25 000的5.6倍(P0.01),且接近Lipofectamine 2000。半乳糖竞争抑制实验表明,100 mmol/L的半乳糖可显著降低Gal-Bu的转染效率(P0.01),但是并不影响PEI-Bu的转染效率(P0.05)。结论 Gal-Bu是一种低细胞毒性、高转染活性的非病毒肝细胞靶向基因载体,在肝脏疾病的基因治疗领域中具有潜在的应用前景。
[Abstract]:Aim to investigate the transfection efficiency of hepatocyte targeted galactosylated polyimide derivative (Gal-Bu) on rat hepatocytes (BRL-3A). Methods PEI-Bu was chemically modified with galactose group to prepare Gal-Bu.The ability of agarose gel electrophoresis to detect the cytotoxicity of Gal-Bu to BRL-3A was detected by agarose gel electrophoresis, and the transfection efficiency of Gal-Bu in BRL-3A cells was determined by using luciferase plasmid as reporter gene. The aim of Gal-Bu on hepatocytes was observed by galactose competitive inhibition experiment. Results agarose gel electrophoresis showed that Gal-Bu had the ability to compound DNA at 15:00. The cytotoxicity of Gal-Bu and PEI 25 000 increased with the concentration of 5 渭 g/mL, and the cytotoxicity of Gal-Bu at the same concentration was lower than that of PEI 25 000 (P0.01). Gal-Bu-DNA reached the highest transfection activity when the mass ratio was 50, its value was 5.6 times of that of PEI 25 000 (P0.01) and close to that of Lipofectamine 2000. Galactose competitive inhibition test showed that galactose could significantly reduce the transfection efficiency of Gal-Bu (P0.01), but did not affect the transfection efficiency of PEI-Bu (P0.05). Conclusion Gal-Bu is a non-viral hepatocyte targeting gene vector with low cytotoxicity and high transfection activity. It has potential application in gene therapy of liver diseases.
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属新华医院老年科;上海交通大学医学院附属第九人民医院老年科;上海交通大学药学院;
【基金】：国家自然科学基金(81001416,30973152,81270205) 上海市科委基金(10JC1408902)~~
【分类号】：R341;Q789

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本文编号：2181336