Ca Hsp90和Ca Rlm1调控白念珠菌表型转换的体外实验研究

发布时间：2018-10-12 06:22

【摘要】：目的:探讨Hsp90和RLM1中CAⅠ序列在白念珠菌表型转换过程的调控作用。方法:(1)在不同 Dox 浓度(0、40、100、150μg/mL)的 lee's glucose和lee's GlcNAc培养基中,分别于25℃和37℃条件培养观察GH1013菌株、基因敲除菌株 GH1013-HSP90/hsp90 和条件性敲除菌株 GH1013-tetO-HSP90/hsp90的菌丝生长情况。(2)利用格德尔霉素抑制Hsp90表达,观测标准菌株SC5314在发酵糖原及非发酵糖原中的生长情况并描绘生长曲线。(3)在GH1013菌株和条件敲除性菌株GH1013-tetO-HSP90/hsp90中构建CDC19、TDH3及PGK1基因与Myc蛋白标签的重组质粒,Western blot检测其菌株中目的蛋白的表达情况。(4)将RLMⅠ基因(CA Ⅰ 11、21或30)分别过表达于GH1011(MTLa/α)、GH1322(MTLa/α)菌株,观察过表达菌株白菌-灰菌表型转换频率。结果:(1)1ee's glucose培养基,25℃和37℃培养条件下,Hsp90低表达时菌丝生长能力强。随Hsp90的表达量提高,菌株的菌丝生长能力减弱。lee'sGlcNAc培养基:①25℃和37℃培养条件下,GH1013菌株和HSP90单敲菌株随Hsp90表达量升高,菌丝生长能力逐渐减弱。②25℃时HSP90条件性敲除菌株随Hsp90表达量升高,菌丝生长能力减弱;而37℃时不同的Hsp90表达量,HSP90条件性敲除菌株形成菌丝的能力无明显差异。另外25℃时,HSP90条件性敲除株在GlcNAc培养基上的生长速度低于glucose培养基。(2)白念珠菌在甘露醇中生长情况最好。Hsp90损伤不影响白念珠菌对葡萄糖、果糖和甘露醇的利用。当GlcNAc作为糖原时,Hsp90持续低表达会促进白念珠菌的细胞凋亡。(3)成功构建白念珠茵MYC-CDC19、MYC-TDH3和MYC-PGK1重组质粒;Western blot证实Myc-CDC19融合蛋白在GH1013-tetO-HSP90/hsp90菌株中能够正常表达。(4)具有不同长度CAⅠ序列(CAⅠ11、21或30)的RLM1基因过表达的GH1011菌株的表型未发生明显的改变。随着CA Ⅰ重复数的增加,RLM1基因过表达的GH1322菌株的白菌向灰菌转换频率上升。结论:白念珠菌的表型转换受到多个基因的调控。(1)白念珠菌的Hsp90表达量越低,促进酵母向菌丝转换'作用越强。(2)Hsp90表达量下降影响白念珠菌对GlcNAc的利用。(3)Hsp90表达量降低,GlcNAc促进白念珠菌细胞凋亡。(4)Hsp90与白念珠菌对发酵糖和非发酵糖原的利用无明显关系。(5)R1的CA Ⅰ基因型对白念珠菌白菌向灰菌形态转换的调控能力具有菌株特异性。
[Abstract]:Aim: to investigate the regulatory effect of CA I sequence in Hsp90 and RLM1 on phenotypic transformation of Candida albicans. Methods: (1) the strains of GH1013 were cultured at 25 鈩，

本文编号：2265103