软骨来源成体干细胞的分离及其鉴定

发布时间：2018-10-24 06:36

【摘要】：目的观察关节软骨中是否存在着软骨干细胞,并对软骨干细胞进行分离、培养和鉴定。方法将软骨组织消化成单个软骨细胞,接种到预先用纤连蛋白处理过的平皿中,20 mins后换液,培养2周时用克隆环挑取形成的单个细胞集落,在体外进行扩增。流式细胞仪检测扩增后细胞表面标志物,并对细胞的成脂肪、成骨、成软骨能力进行验证。结果成功挑选出软骨细胞集落,培养至第3代,细胞呈均一的长梭形。细胞表面表达间充质干细胞相关抗原CD44、CD29、CD73、CD90和CD166,且几乎不表达CD45、CD34和CD133。用诱导培养基培养时,软骨干细胞能成功的向脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞进行分化。结论关节软骨中存在着软骨干细胞,并成功的对软骨干细胞进行了分离和鉴定。
[Abstract]:Objective to observe the existence of chondrocytes in articular cartilage, and to isolate, culture and identify chondrocytes. Methods the cartilage tissue was digested into a single chondrocyte and inoculated into a plate pretreated with fibronectin. After 20 mins of culture, a single cell colony was isolated and amplified in vitro. Flow cytometry was used to detect the biomarkers of expanded cells, and the ability of adipogenesis, osteogenesis and cartilage formation was verified. Results the colony of chondrocytes was successfully selected and cultured to the third passage. Expression of mesenchymal stem cell associated antigens CD44,CD29,CD73,CD90 and CD166, on cell surface and almost no expression of CD45,CD34 and CD133. When cultured in induction medium, chondrocytes could differentiate into adipocytes, bone cells and chondrocytes successfully. Conclusion there are chondrocyte stem cells in articular cartilage, and the chondrocyte stem cells have been isolated and identified successfully.
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院骨科;
【基金】：国家自然科学基金(81130034)
【分类号】：R329

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本文编号：2290605