单纯疱疹病毒1型感染恒河猴模型的建立及其致病性的研究

发布时间：2019-01-30 07:26

【摘要】：单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus type 1, HSV-1)是人群中感染率最高的病毒之一,它的最主要的特征是能在受感染的宿主中建立终身潜伏并定期激活形成复发感染。因此,该病毒的感染一直是多年以来难以控制的临床流行病。而研究HSV-1的致病特点和机理成为了HSV-1临床流行及预防的重点,由于许多临床病例初次感染后无症状和病毒的嗜神经性特点,很难在临床上研究人的HSV-1感染,因此,寻找合适的研究载体——动物模型则是这一研究工作的主要内容。长期以来,动物模型是研究各种人类疾病不可缺少的工具,动物模型的发展推动着医学生物学研究的进步。建立合适的动物模型己成为目前生物科学研究的重大需求和关注热点。现有的工作表明,灵长类动物在进化关系上与人类最为接近,是较为理想的用于人类疾病发病机制、药物治疗和疫苗开发的实验动物,现己广泛应用于各种传染性疾病的研究领域。但有关HSV-1感染的灵长类动物模型研究至今尚未形成系统。基于过去灵长类动物模型在人类感染性疾病中所体现出的优势。本论文研究中,模拟人类自然接触感染HSV-1的过程,取103 CCID50/ml的HSV-1-8F毒株经口唇黏膜上皮组织和眼角膜上皮组织途径感染恒河猴,比较HSV-1经两种途径感染恒河猴后的致病特点。原发感染后对急性感染期恒河猴的临床特征、体温、血常规指标、淋巴细胞变化情况、血清中和抗体效价进行观察,同时通过实时荧光定量PCR方法检测眼、鼻、口、尿、肛拭子、血液中的病毒载量和不同组织器官中的病毒分布情况,进一步观察组织的病理变化并通过免疫组织化学技术对口唇疱疹组织和部分神经系统组织进行检测。结果发现HSV-1感染恒河猴后可造成恒河猴体温升高,形成口唇疱疹等临床症状,口唇黏膜感染的恒河猴相比于眼角膜感染的恒河猴,首次出现口唇疱疹的临床表现较早且症状较为严重。血常规的检测结果显示感染后恒河猴外周血单核细胞比例显著上升,超出正常范围值,其他血细胞的比例均在正常范围内有所变化。实时定量PCR检测感染后1至10天的眼、鼻、口、尿、肛拭子及血液中的病毒载量结果显示,这些部位的分泌物均可敏感显示病毒载量的变化,另外血液中的病毒DNA于感染后的第6天亦出现明显的升高,拭子和血液的病毒载量和出现口唇疱疹的临床症状存在一定的关系。组织中病毒的分布结果显示可从感染恒河猴的部分神经系统的、淋巴系统和部分其他器官组织中检测到病毒DNA的存在。不同感染方式导致的病毒的在体内的分布方式具有明显差异。恒河猴部分神经系统和口唇疱疹病理组织学观察结果显示HSV-1感染恒河猴后可造成严重的口唇疱疹性皮损,但中枢神经组织未见明显病理变化。与此同时通过免疫组织化学技术可于中枢神经组织中检测到HSV-1的存在。本研究的长期观察表明感染后在六个月至一年后,动物能够出现类似潜伏感染的复发感染所表现的出的口唇疱疹的临床症状,采用普通PCR即可检测到恒河猴各种分泌物中的病毒。同时,临床观察提示,潜伏感染于恒河猴的HSV-1会在某些条件下激活并再次引起口唇疱疹。利用恒河猴神经组织共培养体外激活病毒的实验证实,病毒存在于三叉神经和桥脑中,其可以通过这些均质化组织在体外与外源细胞共培养的方式,激活潜伏的病毒。另外,采用RNA测序技术对HSV-1感染恒河猴后0,4,8,12,60,150天外周血淋巴细胞的转录本变化情况进行检测和分析比较。结果分析发现感染后有52个基因存在显著差异,这些基因涉及到免疫系统、细胞进程和相互作用、转录调节、转导调节等,该结果说明HSV-1感染恒河猴后激活了机体的免疫系统,导致血液中相关的免疫相关细胞因子及趋化蛋白的改变。本研究获得的结果提示了一个HSV-1感染恒河猴的感染系统过程,其可为一个有效的动物模型提供基础,其主要特征不仅可以在恒河猴出现了口唇疱疹等临床表现的原发感染病理学过程,同时还提示了该病原在动物体内长期存在,并在一定条件下出现复发感染的表现,从这个意义上看,应用恒河猴作为HSV-1感染动物进行HSV-1的感染生物学研究是具有可能的。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R511

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