BCMA-Fc-Myc融合蛋白的构建、表达及活性鉴定

发布时间：2019-06-06 19:54

【摘要】：目的:旨在可溶性BAFF受体末端加上myc标签,构建BCMA-Fc-myc,用于竞争ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc与BAFF的竞争性结合能力。方法:通过PCR法获得BCMA-Fc-Myc基因,进而构建重组子pET28a-BCMA-Fc-Myc,转入E.coli BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达。采用蛋白A凝胶亲和柱进行纯化以及ELISA法检测其生物活性。结果:成功获得了BCMA-Fc-Myc重组基因和pET28a-BCMA-Fc-Myc重组子。并表达和纯化得该融合蛋白,且其能够与BAFF特异性结合。结合活力呈现剂量依赖性,浓度50ng/μl时,两者的吸附达饱和。结论:此研究表达的BCMA-Fc-Myc融合蛋白具有结合BAFF的生物活性,可作为其他融合蛋白竞争性ELISA的对照蛋白,为用于筛选BAFF拮抗肽的竞争ELISA实验平台。
[Abstract]:Aim: to construct BCMA-Fc-myc, for competitive ELISA analysis of competitive binding ability of BAFF antagonistic peptide-Fc to BCMA-Fc-myc and BAFF by adding myc label to the end of soluble BAFF receptor. Methods: BCMA-Fc-Myc gene was obtained by PCR, and then the recombinant pET28a-BCMA-Fc-Myc, was constructed and transferred into E.coli BL21 (DE3) for expression of fusion protein. Protein A gel affinity column was used for purification and ELISA assay was used to detect its biological activity. Results: BCMA-Fc-Myc recombinant gene and pET28a-BCMA-Fc-Myc recombinant were successfully obtained. The fusion protein was expressed and purified, and it could specifically bind to BAFF. The binding activity was dose-dependent. At the concentration of 50ng/ 渭 l, the adsorption of the two reached saturation. Conclusion: the BCMA-Fc-Myc fusion protein expressed in this study has the biological activity of binding BAFF, and can be used as the control protein of competitive ELISA of other fusion proteins and as a competitive ELISA experimental platform for screening BAFF antagonistic peptides.
【作者单位】： 天津大学药物科学与技术学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(“新型BAFF拮抗剂在系统性红斑狼疮中治疗作用的研究”,81273308)资助~~
【分类号】：R392.2

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 吴蔚;陈民利;;BAFF在自身免疫性疾病方面的研究进展[J];中国比较医学杂志;2012年01期

【共引文献】

相关期刊论文 前2条

1 欧子强;唐勇;向军俭;吕卫东;林婷婷;;小鼠B淋巴细胞活化刺激因子可溶性片段在毕赤酵母中的表达、纯化及其生物学活性的初步鉴定[J];中国生物制品学杂志;2013年06期

2 何阳阳;阎雨;杜冠华;;系统性红斑狼疮的细胞因子疗法研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2013年05期

相关硕士学位论文 前2条

1 吴云红;利妥昔单抗对实验性变态反应性脑脊髓炎防治作用的研究[D];泸州医学院;2012年

2 许小玲;TLR9、IFN-α及BAFF在系统性红斑狼疮患者中的表达水平及其意义[D];福建医科大学;2013年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王晓非;袁双龙;蒋力;张晓莉;李舒帆;郭韵;吴春玲;陈涓涓;;系统性红斑狼疮患者血清BAFF和IL-21的变化及意义[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年11期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 于健,王久莉,孙琦,陈奖励,宋秀龙,李树祥;新城疫病毒NP蛋白的真核表达载体的构建[J];哈尔滨医科大学学报;2000年05期

2 杨峗,尹文,刘建文,邓仲良,陈丽丽,欧阳颐;HBV S基因与HCV C基因嵌合真核表达质粒的构建及鉴定[J];实用预防医学;2003年02期

3 鲍传志;;浅析新型医患关系的构建[J];西南国防医药;2008年06期

4 吴国球,沈子龙;噬菌体展示载体的构建[J];中国药科大学学报;2002年06期

5 陈晓光,李华,彭鸿娟,周晓红,沈树满,冯明钊;日本血吸虫尾蚴cDNA文库的构建及分析[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2002年01期

6 沈丽琴,徐颖,张学光;人可溶性4-1BB蛋白分子表达载体的构建[J];南京医科大学学报(自然科学版);2003年01期

7 方华;王祝华;;论“一式、三化”新型教学管理模式的构建[J];杭州师范学院学报(医学版);2006年03期

8 冯建军;如何构建一个简易的多媒体教室[J];卫生职业教育;2001年S3期

9 宋岚芹;构建妇幼保健院特色文化 营造高层次的服务理念和管理模式[J];中国妇幼保健;2003年03期

10 孟舒,吴弘,关战军,秦永文,沈茜;可调控性鼠血管生成素相关蛋白2的重组腺病毒制备[J];中国急救医学;2003年12期

相关会议论文 前10条

1 高青山;张旭;张海池;;企业融合构建事故预警机制初探[A];2009’中国金属学会冶金安全年会论文集[C];2009年

2 余宏;张萌;;上海市静脉产业的发展现状及平台构建[A];2009中国可持续发展论坛暨中国可持续发展研究会学术年会论文集(上册)[C];2009年

3 滕亮;;浅谈如何构建和谐医患关系[A];湖南省卫生经济与信息学会第一届理事会第二次会议暨第一次学术年会专辑[C];2010年

4 王勇;张华钢;;务实创新 兴利除弊 构建市县环境监察新体制[A];中国环境科学学会2006年学术年会优秀论文集（上卷）[C];2006年

5 纪建悦;张志亮;郭春静;;构建塔型城市创新体系的探讨[A];第八届中国管理科学学术年会论文集[C];2006年

6 吕风梅;;关于烟草企业构建内部和谐的思考[A];华北、东北地区2007年度烟草学术交流研讨会论文集[C];2007年

7 黄翅勤;田亚平;;和谐旅游与和谐旅游城市的构建[A];人居环境学研究论文集[C];2007年

8 王军华;;探讨节约新理念在园林景观中的运用[A];北京市“建设节约型园林绿化”论文集[C];2007年

9 屠明星;;构建和谐企业 促进烟草发展[A];湖北省烟草学会2007年学术年会论文集[C];2007年

10 孙亚玲;;关于构建公共图书馆四级结构体系的思考[A];和谐社会中的图书馆建设与发展——陕西省图书馆学会第六次科学讨论会论文集[C];2007年

相关重要报纸文章 前1条

1 本报记者 方彤 郑颖t，

本文编号：2494558