弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达
【图文】：
表达载体的构建与鉴定用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶分别双酶切ＰＣＲ产物和ｐＣＤＮＡ３．１质粒，分别回收目的基因ＲＯＰ１８小片段和载体ｐＣＤＮＡ３．１大片段，加入Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受态细胞，用卡那霉素筛选阳性克拢鉴定为阳性克隆的重组质粒经ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，获得约５．４ｋｂ和１．６ｋｂ两条带，大小与载体片段和目的ＤＮＡ长度相符；用引物进行ＰＣＲ扩增（扩增条件同上），得到单一条带，与预期结果一致（图２）。测序结果进一步表明重组子含有ＲＯＰ１８基因。ＭＤＮＡ分子质量标准１ｐＥＴ－ＲＯＰ１８ＰＣＲ产物２ｐＥＴ－ＲＯＰ１８用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切图２重组质粒ｐＣＤＮＡ－ＲＯＰ１８的ＰＣＲ和酶切鉴定ＭＤＮＡｍａｋｅｒ１ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１８２ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１８ｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢＦｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ５ｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ·５２８·中国病原生物学杂志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１３年６月第８卷第６期Ｊｕｎｅ２０１３，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．６
ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１ＢＬ２１ｗｉｔｈｏｕｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎ２ｐＥＴ－２８ａｗｉｔｈｏｕｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎ３ｐＥＴ－２８ａｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈＩＰＴＧ４ｐＥＴ－ＲＯＰ１８ｗｉｔｈｏｕｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎ５ｐＥＴ－ＲＯＰ１８ｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈＩＰＴＧＦｉｇ．３ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ４重组蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表达产物转至ＮＣ膜上后，，进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，显示该蛋白可被鼠抗弓形虫阳性血清识别（图４）。表明该蛋白具有免疫反应原性。Ｍ蛋白标志物１重组阳性质粒ｐＥＴ－ＲＯＰ１８裂解物与鼠抗弓形虫血清反应条带２空载体ｐＥＴ－２８ａ裂解物对照图４表达产物的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆｐＥＴ－ＲＯＰ１８ｒｅｃｏｇ－ｎｉｚｅｄｂｙａｎｔｉｓｅｒａｆｒｏｍｍｉｃｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ２ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆｐＥＴ－ＲＯＰ１８ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｂｙａｎｔｉｓｅｒａｆｒｏｍｍｉｃｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄＦｉｇ．４Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ讨论目前在弓形虫病的免疫研究方面，大都致力于寻找和开发能有效刺激宿主产生保护性免疫应答和抵御弓形虫感染的免疫原。与其他单细胞生物一样，弓形虫含有多种具有免疫原性的分泌抗原，而这些代谢分泌抗原可诱导弓形虫特异性Ｔ细胞增殖，刺激Ｔ细胞介导的免疫反应，并促进ＩＦＮ－γ的分泌，提高小鼠抗弓形虫攻击感染的保护性。弓形虫体分泌抗原主要由虫体
【作者单位】： 海南医学院 海南省热带病重点实验室;
【基金】：海南省自然科学基金项目(No.809018)
【分类号】：R382.5
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