锦灯笼果实多糖通过小鼠树突状细胞表面TLR4增强免疫作用机制研究

发布时间：2019-07-24 15:19

【摘要】：近些年,随着人们对植物多糖研究的不断深入,其免疫调节活性成为研究热点。树突状细胞(Dendritic cell,DC)是目前所知机体免疫系统中功能最强的抗原提呈细胞(APC),它的成熟能启动特异性免疫应答,而DC上的Toll样受体在此过程中起到至关重要的作用。本课题组通过实验发现,锦灯笼果实水溶性多糖(PPSB)在白色念珠菌核酸疫苗中发挥佐剂效应,且这种免疫增强作用与小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)表型和功能成熟有关,并初步证明PPSB在BMDC表面的受体为TLR4。本论文以TLR4为研究对象,以DC为切入点,研究PPSB的免疫增强作用原理。本论文结论如下:1.PPSB通过MAPKs及NF-κB信号通路对BMDC发挥作用本实验分离提取C57BL/6小鼠骨髓细胞,用IL-4、GM-CSF联合培养BMDC至第6天,分别用浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB处理未成熟的BMDC,以RPMI1640培养基作为空白对照组,Western blot法检测PPSB对BMDC信号通路的影响。结果显示,与空白对照组相比,不同浓度PPSB均能增加MAPKs(包括ERK1/2、JNK、p38)、NF-κB p65及IκBα的磷酸化水平,说明PPSB可以通过活化MAPKs及NF-κB两条信号通路对BMDC发挥作用。2.BMDC表面TLR4影响PPSB的免疫增强作用为进一步证明PPSB与BMDC表面受体TLR4的作用关系,本实验分离提取TLR4缺陷型及野生型C57BL/10小鼠骨髓细胞,用IL-4、GM-CSF体外诱导培养BMDC至第6天,分别用浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB处理两种小鼠BMDC,并通过以下两种方法进行分析:(1)通过Western blot法检测WT和TLR4-/-小鼠树突状细胞MAPKs、NF-κB及IκBα磷酸化情况。研究结果表明,PPSB可以通过BMDC表面TLR4激活MAPKs和NF-κB信号通路;(2)通过ELISA法检测PPSB对WT和TLR4-/-小鼠BMDC细胞因子分泌的影响。结果证实,PPSB诱导BMDC分泌IL-4、IL-10、IL-12及IL-18与其表面TLR4有关。综上所述,BMDC表面TLR4在PPSB免疫增强过程中发挥重要作用。
【图文】：

22图 1 PPSB 对小鼠树突状细胞 MAPKs 信号通路相关蛋白的影estern blot 定量分析（n=3）Western blot 定量分析（n=3）1/2 Western blot 定量分析（n=3）同字母组别之间代表差异显著（P＜0.05），标记相同字母组别之间代05）。

锦灯笼果实多糖通过小鼠树突状细胞表面TLR4增强免疫作用机制研究

图 2 PPSB 对小鼠树突状细胞 NF-κB 信号通路相关蛋白的影响 p65 Western blot 定量分析（n=3）estern blot 定量分析（n=3）字母组别之间代表差异显著（P＜0.05），，标记相同字母组别之间代表）。B 经 BMDC 表面 TLR4 发挥免疫调节作用DC 表面 TLR4 影响 PPSB 激活 MAPKs 与 NF-κB 信号转导的研究表明，植物多糖主要通过 TLR4 发挥作用，而 TLR4员，是最主要的模式识别受体，也是目前备受关注的受体之TLR4-/-小鼠为实验动物分离提取骨髓细胞，收集未成熟状态不同浓度 PPSB、LPS（TLR4 特异性配体）及 PGN（TLR2 特以 RPMI1640 完全培养基作空白对照，通过 Western blot 法检65 及 IκBα磷酸化情况。PPSB 通过 BMDC 表面 TLR4 激活 MAPKs 信号通路
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R392

【参考文献】