创伤弧菌溶细胞素中类蓖麻毒素功能模序的细胞毒活性研究

发布时间：2019-10-27 17:33

【摘要】：创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnificus cytolysin,VVC)氨基酸序列的313-445位(Gi No.M34670)与蓖麻毒素B链(Ricinchain B,RTB)的一段高度同源,为类蓖麻毒素。基因克隆表达创伤弧菌溶细胞素类蓖麻毒素(rRicin B),Ni2+亲和层析法及透析复性法进行纯化、复性。用纯化的rRi-cin B免疫日本大耳兔获得多克隆抗体,兔抗rRicin B多克隆抗体经盐析法、分子筛纯化后,得到较纯的IgG分子。免疫印迹结果显示,抗rRicin B多克隆抗体与纯化抗原呈现特异性反应条带。流式细胞术结果显示,rRicin B诱导细胞凋亡呈剂量依赖关系,多抗能够阻断其细胞毒性。至此,该工作成功制备了兔抗rRicin B的多克隆抗体,并证明了创伤弧菌溶细胞素结构基因的类蓖麻毒素功能域具有细胞毒活性,能诱导Hela细胞凋亡,且其细胞毒活性能被其多抗成功阻断。
【图文】：

tinducedbyIPTG;3:bacteriainducedbyIPTG;4,5:supernatantandsedimentofthetotalbacteriaultrasound-ed;6:washedinclusionbodyofrRicinB;7:totalbacteriaproteinafterpenetratedthroughthecolumn;8-14:totalbacteriaproteinelutedwith0,20,40,60,80,100,200mmol/Limidazole.图1SDS-PAGE分析融合蛋白rRicinB的表达、纯化Fig.1AnalysisofexpressionandpurificationofrRicinBbySDS-PAGE1:纯化后的rRicinB;2:洗涤后的沉淀;3:蛋白分子量标准。1:purifiedrRicinBprotein;2:washedinclusionbodyofrRicinB;3:proteinmarker.图3rRicinB蛋白的Westernblot分析Fig.3IdentificationofexpressionofrRicinBbyWesternblot1:蛋白分子量标准;2:复性后rRicinB蛋白。1:proteinmarker;2:renaturedrRicinBprotein.图2SDS-PAGE分析复性后rRicinB蛋白的纯度Fig.2AnalysisofpurificationofrenaturedrRicinBbySDS-PAGE

hroughthecolumn;8-14:totalbacteriaproteinelutedwith0,20,40,60,80,100,200mmol/Limidazole.图1SDS-PAGE分析融合蛋白rRicinB的表达、纯化Fig.1AnalysisofexpressionandpurificationofrRicinBbySDS-PAGE1:纯化后的rRicinB;2:洗涤后的沉淀;3:蛋白分子量标准。1:purifiedrRicinBprotein;2:washedinclusionbodyofrRicinB;3:proteinmarker.图3rRicinB蛋白的Westernblot分析Fig.3IdentificationofexpressionofrRicinBbyWesternblot1:蛋白分子量标准;2:复性后rRicinB蛋白。1:proteinmarker;2:renaturedrRicinBprotein.图2SDS-PAGE分析复性后rRicinB蛋白的纯度Fig.2AnalysisofpurificationofrenaturedrRicinBbySDS-PAGE
【作者单位】： 温州医学院检验医学院生命科学学院;
【基金】：浙江省自然科学基金(批准号:Y2090468)资助的课题~~
【分类号】：R363

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2553011