低渗透压通过促进板状伪足的形成加速细胞缺口的关闭

发布时间：2019-11-28 18:59

【摘要】：目的:通过PDMS微柱法建立细胞伤口愈合模型,通过对比等渗透压,研究低渗透压对细胞缺口愈合的影响,研究低渗透压对细胞迁移速度、细胞肌动蛋白环及板状伪足的影响,并对低渗透压对细胞缺口关闭的作用机制进行初步探讨。方法:实验细胞MDCK细胞(犬肾上皮细胞),随机分为低渗组(n=5)和等渗组(n=6)作延时拍摄观察细胞运动;用深反应离子刻蚀法制作好圆形微阵列凹槽的硅片板,深100μm,直径180μm。往硅片板上灌注1:10PDMS,加热后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后,往模具下方种下MDCK细胞,待单层细胞长满后,拔出柱子即在单层细胞中造出直径180微米的缺口。活细胞工作站下(37°C,5%CO2),显微镜下连续延时定点拍照,5分钟拍一张,获得图片后分析低渗透压(~150m Osm)和等渗透压(~300m Osm)条件下细胞缺口关闭速度、伪足面积伸出的情况。此外,MDCK细胞低渗透压和等渗透压条件下分别处理15分钟后,固定细胞,并做荧光染色,观察不同渗透压下细胞肌动蛋白环的形成情况。结果:细胞缺口关闭过程边缘曲线周长变化图中,可以看出低渗透下细胞缺口关闭比等渗压下要快。计算速度后发现,低渗组细胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5,mean±s.d.),等渗组细胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6,mean±s.d.)。细胞缺口关闭过程伪足伸出边缘面积变化图中,可以看出低渗透压下板状伪足要比等渗压下的要明显,低渗压板状伪足伸出面积1137.46±70.26μm2(n=5,mean±s.d.),等渗压板状伪足伸出面积60.44±21.87μm2(n=6,mean±s.d.)。等渗压下可见肌动蛋白环的形成,而低渗透压下几乎观察不到。荧光光密度分析曲线图中,等渗压下在缺口边缘出现了荧光光密度的波峰,而低渗透压下没有出现。结论:1、低渗压环境下,MDCK细胞伤口愈合速度比等渗透压下的更加快。低渗透压下的板状伪足比等渗透压下的更明显,而低渗透压下没有形成肌动蛋白环。2、低渗透压下,加速细胞缺口的关闭可能机制是通过促进板状伪足的形成。3、在细胞缺口关闭过程中,板状伪足对关闭速度的影响比肌动蛋白环的影响更大。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R363

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