载肝细胞生长因子PLGA纳米粒治疗四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤模型的研究

发布时间：2020-03-23 09:54

【摘要】：肝脏是人体的排毒器官,容易受到各种因素影响而损伤。临床中常需要应用化疗为病人进一步治疗创造机会,不可避免会引起肝损伤。因此,在化疗中常辅以保肝药物。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种多功能生长因子,在肝脏再生中起重要作用。然而HGF的半衰期极短,来源有限,极大限制了临床应用。再者HGF作为生长因子,大量迅速入血会产生全身中毒作用,需要高效和安全使用HGF。聚乳酸羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)有良好的生物相容性和降解性,已被美国FDA批准应用于药物制剂。研究表明,载生长因子PLGA纳米粒能使生长因子不易被降解,增加在机体的稳定性并提高生物利用度。[目的]应用实验室构建的PLGA纳米粒缓释体系,制备含不同浓度HGF的纳米粒,对纳米粒的质量进行评估,并用于治疗CC14诱导小鼠急性肝损伤模型,验证纳米粒的作用。[方法]CCK-8测定HGF对HepG2增殖最佳刺激浓度。实验室构建的纳米粒缓释体系制备含不同浓度HGF纳米粒,纳米粒度仪检测粒径大小、多分散系数和zeta电位;透射电镜观察表面和内部结构;BCA和ELISA检测载药量和体外释放曲线;电子天平称量计算回收率。设置对照、模型、HGF60ng、HGF120ng、NPs、HGF-NPs-2μg和HGF-NPs-4μg组小鼠。尾静脉注射HGF溶液或纳米粒72h造模,24h后取材。ELISA检测血液和肝组织HGF浓度。观察肝脏大体和HE切片,计算肝脏系数和病变率。全自动生化分析仪测定AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN和Scr浓度。ELISA测定肝组织中SOD、GPX和MDA含量。[结果]HGF浓度为40ng/ml和80ng/ml时,能显著促进HepG2增殖。制备的三种纳米粒物理性质良好,大小分布均匀,单峰分布,回收率稳定,约40%。能达到药物突释和缓释效果,载药量为(4.21±0.15)%、(0.001268±0.000058)%和(0.002422 ±0.000030)%。与相同量HGF溶液比,HGF纳米粒组小鼠血液和肝组织中HGF浓度更高,AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN 和 Scr 浓度更低,SOD、GPX 含量更高,MDA较少,肝组织坏死面积减少,肝脏水肿程度降低。[结论]成功制备含不同载药量HGF的纳米粒,物理性质良好稳定,大小分布均匀,呈单峰分布,回收率稳定,能够达到药物突释和缓释的效果。HGF纳米粒能在更长的时间内,使HGF在小鼠血液和肝组织中维持更高的浓度。当小鼠肝脏受到CCl4损伤时,能更显著降低血液中AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN和Scr的浓度,提高肝组织中SOD、GPX的含量,降低MDA的生成,减少肝组织坏死、炎症浸润,降低组织水肿,维持小鼠肝功能和肾功能。
【图文】：

逑７２、９６、１２０ｈ检测ＯＤ４５０的吸光度。根据ＣＣＫ－８测定的结果（见表１－１）绘逡逑制成ＯＤ４５０吸光度曲线，结果如下图１－２所示。ＨＧＦ在一定浓度范围内对ＨｅｐＧ２逡逑细胞系呈浓度相关性。当ＨＧＦ浓度为４０ｎｇ／ｍｌ和８０ｎｇ／ｍｌ时，ＨｅｐＧ２细胞的增逡逑殖最为明显，而当ＨＧＦ浓度逐渐升高时，其对ＨｅｐＧ２增殖的影响并不明显。逡逑当ＨＧＦ浓度达到６４０ｎｇ／ｍｌ和１２８０ｎｇ／ｍｌ时，甚至出现了抑制细胞生长的情况。逡逑表１－１不同浓度的ＨＧＦ刺激ＨｅｐＧ２细胞增殖的统计（ｎ＝５，邋Ｉ±ｓ）逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＨｅｐＧ２邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ逡逑ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＨＧＦ邋（ｎ＝５，邋ｘ±ｓ）逡逑组别逦时间逡逑（ｎｇ／ｍｌ）逦１２ｈ逦２４ｈ逦４８ｈ逦７２ｈ逦９６ｈ逡逑对照组逦０．３１５±０．０３０４逦０．６９０±０．０２３８逦０．９４１±０．０２９０逦１．２３７±０．０５８９逦１．２４２±０．０３９１逡逑１逦０．３０５±０．０２２２逦０．６３８士０．０５０４逦０．８８４±０．０５４２逦１．１８９士０．０２２０逦１．１９０±０．０２２３逡逑１０逦０．３０９±０．０２１６逦０．６４３土０．０３４６逦０．８８５土０．０６３８逦１．２０５±０．１０９６逦１．２１０±０．１０２０逡逑２０逦０．３２２±0

完成３种纳米粒，包括空白纳米粒（ＮＰｓ），ＨＧＦ初始投药量为２｜ｉｇ的低浓逡逑度纳米粒（ＨＧＦ－ＮＰｓ－２ｎｇ）和ＨＧＦ初始投药量为４ｐｇ的高浓度纳米粒逡逑（ＨＧＦ－ＮＰｓ－４＾ｇ）的制备后，首先观察各种纳米粒的表面和内部形态。如图２－１逡逑所示，将纳米粒制备成混悬液后滴进铜网并用磷钨酸进行染色，通过透射电镜逡逑观察可见，在放大２００００倍观察时，３种纳米粒的形态和大小非常接近，均在逡逑约２００ｎｍ左右，纳米粒呈球状，膜壳药库型，表面光滑。纳米粒冷冻干燥后，逡逑为乳白色粉沫状，如图２－１结果所示。逡逑丨，，，ｖｊｊ逡逑ＮＰｓ逦ＨＧＦ－ＮＰｓ－２＾ｉｇ邋ＨＧＦ－ＮＰｓ－４＾ｇ逡逑图２－１逦３种纳米粒的透射电镜图（＞＜２００００倍）及冻干产品逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ邋ｅｌｅｃｔｒｏｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋ｉｍａｇｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｋｉｎｄｓ邋ｏｆ邋ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ邋（＞＜２００００）逡逑ａｎｄ邋ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ邋ｐｒｏｄｕｃｔ逡逑２．３．２逦３种纳米粒的粒径大小、Ｚｅｔａ电位和多分散系数逡逑透射电镜下观察到３种纳米粒均呈球状，且大小接近。为进一步测量纳米逡逑粒的大小分布、稳定性情况等性质
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575;R-332

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本文编号：2596558