γ—氨基丁酸A型受体β3亚基在TCDD诱导腭裂模型中的表达研究
发布时间：2020-04-01 22:03
【摘要】：目的:检测γ-氨基丁酸A型受体β3亚基(Gamma-aminobutyric acid type A receptor beta3 subunit,GABRB3)在环境污染物2,3,7,8-四氯二苯并二VA英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导C57BL/6J胎鼠腭裂模型中的表达情况,探究GABRB3与TCDD诱导的先天性腭裂的关系。方法:将60只C57BL/6J孕鼠按照随机数字表法分为实验组和对照组,每组30只。妊娠第10.5天(Gestation Day10.5,GD10.5)实验组以28μg/kg剂量的TCDD单次灌胃,对照组以5.6ml/kg剂量的玉米油单次灌胃。分别在GD13.5、GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5进行胎鼠腭部大体形态学和组织学观察;应用Q-PCR和Western Blot技术检测GABRB3在不同妊娠时期的胎鼠腭组织中mRNA和蛋白的表达水平;免疫组织化学法和免疫荧光法检测GABRB3蛋白在腭组织上的表达定位。结果:实验组共获164只活胎鼠,均发生腭裂(100%);对照组共获188只活胎鼠,均无腭裂发生(0%)。较对照组相比,实验组胎鼠腭架上抬延迟1天。GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5实验组中GABRB3的mRNA和蛋白相对表达量均显著低于对照组(P0.05)。对照组GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5中GABRB3的mRNA和蛋白相对表达量显著高于该组GD13.5(P0.05),实验组GD15.5、GD16.5中GABRB3的mRNA和蛋白相对表达量显著高于该组GD13.5、GD14.5(P0.05)。免疫组织化学和免疫荧光结果显示,GABRB3主要表达于腭突间质细胞和腭突中嵴上皮缝。结论:采用28μg/kg剂量的TCDD成功建立了C57BL/6J胚胎鼠腭裂模型,证实了TCDD诱导腭裂的高效性和稳定性。TCDD诱导胎鼠腭架上抬延迟并最终导致腭裂发生可能与GABRB3表达降低有关;GABRB3可能在腭部发育的上抬和融合过程中发挥重要作用。
【图文】：
图 1 不同妊娠时期对照组和实验组胎鼠腭部发育形态图（20×）Figure 1 Gross morphology in control group and experimental group at different pregnancystage (20×)2.3 C57BL/6J 小鼠不同妊娠时期胎鼠头组织冠状位 HE 染色HE 染色进行腭组织学观察，对照组 GD13.5 胎鼠的双侧腭突垂直于舌部两侧（图 2A），GD14.5 腭突位于舌部上方开始呈水平方向生长（图 2B）；GD15.5 腭突于中线处发生融合，可见未完全消失的腭突中嵴上皮缝（图 2C）；GD16.5 腭融合完全未见上皮缝且在融合的腭部中上部可见明显细胞聚集（图 2D）；GD17.5 形成完整上腭分隔口鼻腔（图 2E）。然而，在 TCDD 作用下的实验组，GD14.5 双侧腭突仍垂直于舌部两侧（图 2G）；至 GD15.5 时双侧腭突位于舌部上方水平位置，在中线处靠近但未发生融合（图 2H），，实验组胎鼠腭架上抬至舌面上方较对照组延迟 1 天；GD16.5 双侧腭突裂隙加宽（图 2I）；GD17.5 形成腭裂（图 2J）。
N 为鼻部；T 为舌部；P 为腭突图 2 不同妊娠时期对照组和实验组胎鼠腭部 HE 染色图（100×）N:nose；T:tongue；P:palateFigure 2 Hematoxylin and eosin staining in control group and experimental group at differentpregnancy stage (100×)2.4 Q-PCR 检测 GABRB3 mRNA 在不同妊娠天数（GD）胎鼠腭组织中的表达水平2.4.1 引物的最适温度和标准曲线结果在本研究中 GABRB3 引物的最适温度为 52℃，并以 10 倍浓度梯度稀释为最适温度产物，其稀释产物作为 cDNA 模板绘制 GABRB3 引物的标准曲线（图 3-1，3-2），GABRB3 引物扩增效率为 102.4%，线性回归系数 R2=0.99，溶解曲线为单峰，特异性良好，有可信度，可用于进一步的 Q-PCR 技术检测。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R782.2;R-332
本文编号：2611003
【图文】：
图 1 不同妊娠时期对照组和实验组胎鼠腭部发育形态图（20×）Figure 1 Gross morphology in control group and experimental group at different pregnancystage (20×)2.3 C57BL/6J 小鼠不同妊娠时期胎鼠头组织冠状位 HE 染色HE 染色进行腭组织学观察，对照组 GD13.5 胎鼠的双侧腭突垂直于舌部两侧（图 2A），GD14.5 腭突位于舌部上方开始呈水平方向生长（图 2B）；GD15.5 腭突于中线处发生融合，可见未完全消失的腭突中嵴上皮缝（图 2C）；GD16.5 腭融合完全未见上皮缝且在融合的腭部中上部可见明显细胞聚集（图 2D）；GD17.5 形成完整上腭分隔口鼻腔（图 2E）。然而，在 TCDD 作用下的实验组，GD14.5 双侧腭突仍垂直于舌部两侧（图 2G）；至 GD15.5 时双侧腭突位于舌部上方水平位置，在中线处靠近但未发生融合（图 2H），，实验组胎鼠腭架上抬至舌面上方较对照组延迟 1 天；GD16.5 双侧腭突裂隙加宽（图 2I）；GD17.5 形成腭裂（图 2J）。
N 为鼻部；T 为舌部；P 为腭突图 2 不同妊娠时期对照组和实验组胎鼠腭部 HE 染色图（100×）N:nose；T:tongue；P:palateFigure 2 Hematoxylin and eosin staining in control group and experimental group at differentpregnancy stage (100×)2.4 Q-PCR 检测 GABRB3 mRNA 在不同妊娠天数（GD）胎鼠腭组织中的表达水平2.4.1 引物的最适温度和标准曲线结果在本研究中 GABRB3 引物的最适温度为 52℃，并以 10 倍浓度梯度稀释为最适温度产物，其稀释产物作为 cDNA 模板绘制 GABRB3 引物的标准曲线（图 3-1，3-2），GABRB3 引物扩增效率为 102.4%，线性回归系数 R2=0.99，溶解曲线为单峰，特异性良好，有可信度，可用于进一步的 Q-PCR 技术检测。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R782.2;R-332
【参考文献】
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3 何晓梦;刘翠苹;蒲亚兰;甘立强;袁心刚;魏光辉;傅跃先;;以形态与组织学为基础筛选诱导胎鼠腭裂的四氯二苯二VA英最适剂量[J];卫生研究;2013年02期
4 傅豫川，黄洪章，李祖兵;小鼠腭发育及腭裂形成过程的渐进性观察[J];口腔医学纵横;1995年01期
本文编号：2611003
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