囊胚孵化位点与内细胞团相对位置对小鼠胚胎着床和发育的影响

发布时间：2020-04-07 03:02

【摘要】：在我国约有10%-15%的育龄妇女不孕,全球多达六分之一的夫妻会遇到生育问题。多数夫妻选择通过辅助生殖技术(Assited Reproductive Technology,ART)来孕育后代。囊胚的挑选和胚胎移植是ART中关键的环节。哺乳动物的胚胎在囊胚时期会形成两种不同的细胞类型:内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)和滋养层(Trophectoderm,TE)。处于囊胚时期的胚胎,需要先从透明带(Zona Pellucida,ZP)中孵化出来,才有植入子宫的能力。ZP是一层包裹在哺乳动物卵母细胞和着床前胚胎外的一层非细胞性糖蛋白,具有识别精子、阻止多精受精和保护卵母细胞及孵化前胚胎的作用。囊胚在孵化前会持续性的扩张,ZP变薄并产生小孔,这类小孔被称为孵化位点。胚胎从孵化位点中孵出后会继续完成着床和妊娠过程。孵化过程对于后续胚胎的继续发育至关重要,但是相关的研究却少有报道。孵化位点在透明带上的位置是随机出现还是有着一定规律,孵化位点的位置对于小鼠胚胎后续着床、妊娠以及对子代是否有影响还有待考究。本研究中我们测量了囊胚孵化位点与内细胞团圆弧中点切线夹角θ的角度,并分为三组:0o≤θ≤30o组,30oθ≤60o和60oθ≤90o组。实验采用非手术胚胎移植(Nonsurgical Embryo Transfer,NSET)的方法,在不进行麻醉与外科手术的情况下,将三组不同孵化角度范围的囊胚通过宫颈直接移入代孕母鼠的子宫内。统计胚胎着床率、妊娠率、产仔率以及后代的生长情况。我们的实验结果表明:囊胚孵化的位置并不影响胚胎的着床率和着床数。但是,囊胚孵化位点的不同会影响到子代小鼠的出生率。对后代进行统计分析,我们发现不同孵化位点囊胚对后代的性别比例和出生重无影响,对雄性后代的生长曲线也无影响,但是对雌性后代的生长曲线却有着影响。我们的实验结果可为临床上挑选发育潜力更高的囊胚提供参考。
【图文】：

示意图,囊胚孵化,角度测量,位点

图 2.1 囊胚孵化位点角度测量示意图。测量时从 ZP 内侧绘制内细胞团圆弧中点切线、圆弧中点点的连线。Figure 2.1 Schematic diagramof angle measurement of blastocyst hatching site. During the measuremengent of the arc midpoint of the ICM and the connection between the midpoint of the arc and the hatchinre drawn from the inside of the ZP.3.6 非手术胚胎移植在 60mm 培养皿中用 M2 操作液做滴，，每滴 50μL，共四个滴。将按照角度分组的囊养箱中拿出，用口吸管移入到 M2 操作液中反复吹吸清洗几次，再移入到新的 M2 操滴里，尽量保证 M2 操作液小滴上面没有石蜡油。将 NSET 的移植导管取出并与 2.5μL 的移液枪连接，将移液枪刻度调至 1.8μL。在显

囊胚,囊胚孵化,位点

内蒙古大学硕士学位论文2.4 实验结果及分析2.4.1 囊胚孵化角度的观察和测量day7 的上午，用 M2 操作液冲出供体母鼠子宫角内的囊胚，放入 CO2培养箱中培养。从注射 hCG 后 94h 起，每隔 2 小时观察囊胚的孵化情况，记录囊胚孵化位点角度、孵化个数，直到注射 hCG 后 100h。这个时间段以外，过早或过晚孵化的囊胚都不记入孵化数据中。有孵化位点的囊胚按照 ICM 圆弧中点切线和孵化位点的夹角 θ 分为 3 组：0o ≤ θ ≤ 30o、30o < θ ≤ 60o和 60o < θ ≤ 90o。图 2.2 列出了了三种不同孵化角度的典型形态。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R321

【参考文献】