干眼小鼠角膜的自噬及其对眼表炎症的调控

发布时间：2020-04-13 00:20

【摘要】：研究背景干眼症(Dry Eye Disease,DED)是影响全世界数百万人的多因素眼表疾病,近年来发病率不断上升。其特征是泪膜稳态的丧失,伴随眼表症状,其发病机制包括泪膜不稳定、泪液高渗透压、眼表炎症与损伤和神经感觉异常。炎症在干眼症的发病机制中起着重要作用。自噬是一个细胞自我吞噬的过程,实现细胞的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬影响炎症细胞的存活、稳定和发展,参与炎性疾病的发生发展。有研究表明,自噬可防止干眼小鼠的泪腺损伤,在干眼患者的发病中也发挥着作用。干眼角膜中自噬的水平及其和炎症之间的关系仍不明确,因此本研究的研究目的为探究干眼小鼠角膜自噬水平的变化和自噬调节剂对干眼的炎症水平的调节和治疗效果。研究方法干燥环境下皮下注射东莨菪碱制作干眼小鼠模型,根据干预时间将40只正常小鼠分为DE-Od、DE-5d、DE-10d、DE-20d四组,泪液分泌检测和角膜荧光素钠染色评分评估造模结果;透射电镜观察角膜组织上的自噬小体,免疫荧光检测各组LC3蛋白的表达,Western Blot检测各组自噬蛋白LC3、ATG5、p62和炎性反应介质蛋白TNF-Ω、MMP-3、MMP-9的表达;根据治疗药物将40只干眼小鼠分为Control组(空白对照组)、DE-PBS组(PBS溶液)、DE-AA组(自噬诱导剂LYN-1604)和DE-AI组(自噬抑制剂3-MA)四组,分别滴眼治疗干眼小鼠,使用电镜、Western Blot、免疫荧光检测角膜自噬水平的变化;泪液分泌检测、角膜荧光素钠染色检测泪液分泌及眼表损伤,HE染色检测角膜病理组织学,Western Blot、免疫荧光检测TNF-α、MMP-3、MMP-9表达水平。研究结果成功建立小鼠混合型干眼模型,干眼角膜自噬水平上升,DE-5d、DE-10d、DE-20d组自噬体数目增加,自噬标志蛋白表达升高(P0.05)且升高水平无明显差异(P0.05),伴炎性反应介质蛋白表达的上升(P0.05);电镜、Western Blot、免疫荧光结果显示DE-AA组、DE-AI组角膜的自噬水平分别上升和下降(P0.05);DE-AA组泪液分泌增多、角膜损伤减轻,DE-AI组角膜损伤严重(P0.05);HE染色显示DE-AA组小鼠角膜细胞损伤减轻;免疫荧光和Western Blot结果显示,DE-AA组干眼角膜上皮的炎性反应介质TNF-α,MMP-3、MMP-9的表达明显下降,而在DE-AI组表达上升(P0.05)。研究结论自噬参与DED的发病机制,干眼角膜自噬水平升高,但不随病情严重继续升高。自噬激活剂LYN-1604能升高角膜自噬水平,减轻角膜组织损伤,降低炎症反应介质的表达,可用于治疗DED;而自噬抑制剂3-MA加重干眼体征和角膜损伤。因此,自噬水平的调控能相应调节眼表炎症水平,为干眼治疗提供了新的方向。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R777.34;R-332

【相似文献】