苯并硼唑类化合物ZCL-082诱导小鼠雌性生殖干细胞自噬的发生及机制研究

发布时间：2020-04-17 09:32

【摘要】：研究背景:近几年在雌性生殖干细胞(FGSCs)的分化、增殖和凋亡等方面做了较多研究。但其它的生物学过程,例如细胞自噬,以及其在FGSCs中的调控机制尚不清楚。此外,小分子化合物因其作用效果具有即时性和可逆性,在细胞自噬的机制研究中发挥了重要的作用。而苯并硼唑类化合物因其良好的化学性质和广泛的功能,在临床研究和治疗中具有很大的潜力,但目前为止,尚未有针对此类化合物在FGSCs中作用的研究报道。研究目的:探究苯并硼唑类化合物ZCL-082在FGSCs发育中的作用及其调节机制。研究结果:在本研究中,我们将化合物ZCL-082(苯并硼唑类杂环的衍生物)加入FGSCs中以检测其作用。通过细胞计数试剂盒8(CCK8)和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)检测,显示ZCL-082可以显著降低体外培养FGSCs的活力、增殖率和数量。除此之外,Western-blot结果显示,当用ZCL-082处理FGSCs 3 h和6 h之后,微管相关蛋白中轻链3β-II(LC3BII)的表达量显著增加,同时P62蛋白(sequestosome-1,SQSTM1)的表达量显著降低,免疫荧光显示LC3B囊泡数目也显著上升,表明FGSCs被ZCL-082诱导发生了自噬。为探讨ZCL-082诱导FGSCs自噬的作用机制,我们检测了该化合物处理细胞后自噬相关lncRNA的表达量变化。结果显示,ZCL-082可以显著降低长链非编码RNA即生长停滞特异性5(GAS5)的表达,而GAS5可以直接结合microRNA-21a(miR-21a)并负性调控其表达。敲除GAS5可以诱导FGSCs的自噬,而GAS5过表达可以抑制体外FGSCs的自噬。回补实验结果表明,过表达GAS5可以一定程度的挽救ZCL-082诱导的FGSCs自噬。此外,与对照组相比,miR-21a的过表达显著增强LC3BII蛋白的表达,同时降低了FGSCs中SQSTM1蛋白的表达和程序性细胞死亡蛋白4(Pdcd4)基因的表达。而抑制miR-21a则显著降低基础的或ZCL-082诱导FGSCs中LC3B-II的表达。与此同时,抑制miR-21a也显著升高Pdcd4基因的表达,升高基础的或ZCL-082诱导FGSCs中SQSTM1的表达。研究结论:本研究表明,ZCL-082能够降低体外培养的FGSCs的活力和增殖能力并诱导FGSCs的凋亡和自噬;过表达GAS5能够一定程度的挽救ZCL-082引起的FGSCs的自噬;ZCL-082通过GAS5/miR-21a轴诱导FGSCs自噬。这些结果有助于理解FGSCs的生理功能和发育机制并为女性生育力保持和临床治疗生殖障碍性疾病提供新的思路。
【图文】：

图 1-1：ZCL-082 处理 FGSCs 后形态图及细胞数目统计Figure1-1： ZCL-082 reduced the number of FGSCs. Morphology of FGSCs treated withvarious concentrations of ZCL-082. Scale bar, 50 μm. Number of FGSCs per 35 mm plate atvarious concentrations of ZCL-082. Values are presented as mean ±SEM of three biologicalreplicates. **P < 0.01. (ⅰ:Control, ⅱ:0.125 μM, ⅲ:0.25 μM, ⅳ:0.5 μM, ⅴ:1 μM, ⅵ:2μM, ⅶ:4 μM, ⅷ:8 μM). Control: DMSO.

图 1-2：ZCL-082 导致 FGSCs 活力降低igure1-2： ZCL-082 reduced the viability of FGSCs. Fold-change in cell viabilitent concentrations was detected by CCK8 assay at 24 h (A) and 48 h (B). Valnted as mean ±SEM of three biological replicates. **P < 0.01.
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R329.2

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本文编号：2630717