磷酸化抗体在反相蛋白阵列中的应用

发布时间：2020-04-20 03:23

【摘要】：反相蛋白质阵列(Reverse-Phase Protein Array,RPPA)技术已经成为强大、灵敏、成本有效、高通量的平台技术方法,用于大量样品的组织或细胞蛋白质分析。通过与磷酸化抗体相结合手段,RPPA能同时测定总蛋白与磷酸化后修饰蛋白,代表了捕获正常或患病细胞中信号通路及关键信号的绝佳方法。RPPA非常适用于生物标志物的发现、临床试验中活检样本的分析、药效学评估、受肿瘤靶向治疗影响的关键蛋白分析等领域,并正逐步发展为肿瘤分型、患者预后、合理药物指导、个性化治疗等临床应用的有力工具。目的:通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列的磷酸化抗体探针,建立细胞信号通路模型,以筛选的磷酸化抗体探针,利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号,以便将该技术进一步应用于新药开发、临床样本分析等领域。方法:制备Akt、MAPK、酪氨酸激酶(RTK)通路中关键激酶的磷酸化抗体,先通过常规免疫学方法对制备抗体进行应用验证;将应用验证后抗体进一步应用于RPPA筛选,筛选出RPPA适用性与可靠性磷酸化抗体作为RPPA探针;使用LNCa P细胞,在4种方式(EGF,LY294,PMA,Na Cl)刺激下建立Akt、Erk/MAPK细胞信号通路模型;利用抗体探针与RPPA技术进行细胞信号通路模型分析。结果:该项目获得53个通过免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)应用方法验证的磷酸化抗体;通过RPPA筛选获得25个RPPA高适用性与可靠性抗体探针;将10个RPPA筛选的高质量抗体探针应用于Akt、MAPK信号通路模型分析,获得4组LNCa P刺激模型的RPPA测试数据。4组模型结果均显示了通路中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹法(WB)分析结果一致,证实了分析数据的有效性与可靠性。结论:成功筛选出RPPA高适用性与可靠性磷酸化抗体探针,成功将抗体探针与RPPA结合应用于细胞信号通路模型分析。表明所制备的抗体探针与RPPA技术平台相结合,极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针,使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。
【图文】：

蛋白质阵列平台类型（上图为正相阵列，，下图为反相阵列）

磷酸化抗体部分鉴定结果
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李思翘;接受抗逆转录病毒治疗的HIV-1/AIDS患者对HIV-1 Vpu的抗体反应[J];中国艾滋病性病;2004年02期

2 梁资富;徐政在;曹济;施秀民;孙晓丽;;囊虫匀浆诱导猪的抗体反应动态[J];甘肃畜牧兽医;1987年02期

3 林清华;植物抗原和抗体的制备及在植物研究中的应用[J];湖北农业科学;1988年05期

4 朱智勇,唐汉英,李岩金,翁景清,傅桂明;流行性出血热病毒沙鼠肾细胞培养灭活疫苗免疫家兔的抗体反应及保护试验[J];病毒学报;1988年02期

5 袁波;;节育疫苗初期试验证明安全[J];国外医学情报;1988年17期

6 王润辰,吴灿理,张永才,任志斌;凝胶扩散-酶联免疫吸附试验检测猪囊虫病抗体[J];第四军医大学学报;1989年05期

7 赵虎,孔宪涛,李乃义;脆弱类杆菌NCTC9343脂多糖抗体的产生[J];上海免疫学杂志;1989年03期

8 虞喜豪,余庆;正常人丙种球蛋白制剂中的抗LPS抗体及其作用[J];上海免疫学杂志;1989年06期

9 薛永祥;生物素-亲和素系统检测抗布鲁氏菌抗体的研究[J];中国地方病学杂志;1989年06期

10 徐永耀,闻玉梅;抗体亲和力[J];国外医学(免疫学分册);1989年06期

相关会议论文 前10条

1 李斌;吕金钢;姚景春;;牛蒡子苷元对大鼠T细胞依赖性抗体反应的影响[A];中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛论文集[C];2015年

2 卢钧雄;段炼;王若伦;易俊波;;人乳头瘤病毒HPV33型E6E7蛋白的表达及多克隆抗体的制备[A];2017年广东省药师周大会论文集[C];2016年

3 任克吉;韩松勇;;氢化可的松琥珀酸钠在急症临床的应用[A];第六届全国危重病学术交流大会论文汇编[C];2005年

4 刘芝安;李晓明;;中草药制剂与体外乙肝表面抗原抗体反应[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年

5 孙贝贝;崔治中;张青婵;娄本红;;ALV-J人工感染鸡病毒血症和抗体反应动态[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

6 艾文超;霍艳;李波;;KLH作为抗原的T依赖性抗体反应方法的建立[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年

7 孟珊珊;崔治中;孙淑红;;REV和ALV-J共感染鸡病毒血症及抗体反应的相互影响[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

8 任克吉;韩松勇;;氢化可的松琥珀酸钠在急症临床的应用[A];中华医学会急诊医学分会全国第11届创伤复苏中毒学术会议论文集[C];2005年

9 孙淑红;崔治中;;REV感染雏鸡、雏鸭对禽流感疫苗抗体反应的抑制作用及其预防控制[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集（下册）[C];2006年

10 郭丽;张曦;任丽丽;俞雪莲;陈丽娟;周红莉;高昕;滕正;李建国;胡佳玉;吴超;肖霞;朱依依;王全意;庞星火;金奇;吴凡;王健伟;;人感染H7N9禽流感病毒的抗体反应[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年

相关重要报纸文章 前3条

1 张乐;青壮年易染“非典”探因[N];中国医药报;2003年

2 唐一尘;抗体缺乏多样性使老年人更易染流感[N];中国科学报;2019年

3 记者 黄磊　周芳;“要知道能成功,还叫什么探索呢”[N];湖北日报;2010年

相关博士学位论文 前10条

1 廖少华;肿瘤神经抗体相关疾病特征和预测因素的临床研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年

2 高秀洁;寨卡病毒感染宿主NS1抗体反应特征及单克隆抗体在早期诊断中的应用[D];广州医科大学;2018年

3 王晓峰;成骨生长肽抗体的制备及其对NIH3T3细胞促增殖作用机理[D];复旦大学;2005年

4 陈冠杰;聚乙二醇修饰的抗体的理化性质及生物学活性[D];中国协和医科大学;1985年

5 刘银星;嵌合抗CD20抗体突变体的表达及其作用机理的研究[D];中国协和医科大学;2003年

6 赵向东;CD34抗体表面修饰去细胞光氧化牛颈静脉再内皮化的研究[D];中南大学;2008年

7 于俊岩;抗HBV多聚酶TP区细胞内VH抗体体外抑制HBV复制的实验研究[D];第三军医大学;2006年

8 于洁;基于结构设计实现在一种细胞系中制备含两种同源二聚体组分的抗体混合物[D];浙江大学;2017年

9 粟玉珍;沙眼衣原体热休克蛋白60与免疫致病[D];中国医科大学;2002年

10 刘建东;诱导HIV-1膜蛋白保护性抗体免疫策略的研究[D];中国疾病预防控制中心;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 林世康;磷酸化抗体在反相蛋白阵列中的应用[D];东南大学;2018年

2 戚海惠;基于VP0蛋白检测1型和3型DHAV抗体的间接ELISA的建立及应用[D];东北农业大学;2019年

3 卢旭;抗β_2微球蛋白纳米抗体的定向固载及其吸附剂的制备[D];大连理工大学;2018年

4 高彩霞;成人手足口病相关肠道病毒非中和抗体反应的初步研究[D];第二军医大学;2016年

5 李昕;DHAV检测方法建立及抗体对其复制的影响研究[D];西南大学;2017年

6 孟珊珊;REV和ALV-J共感染对病毒血症和抗体反应的相互影响及REV传播途径的研究[D];山东农业大学;2006年

7 郭雅莉;抗β2M纳米抗体的定点生物素化修饰及其应用[D];大连理工大学;2017年

8 黄艳芬;登革病毒包膜蛋白Ⅲ区单抗中和作用与作用机制研究以及登革病毒初次感染患者血清中和抗体反应分析[D];南方医科大学;2013年

9 孙贝贝;不同日龄SPF鸡感染ALV-J后病毒血症和抗体反应的动态比较[D];山东农业大学;2009年

10 董晖;EB病毒重组Rta蛋白多克隆抗体的初步应用[D];四川大学;2007年

本文编号：2634091