泼尼松龙联合IL-2体外短期处理对Treg细胞的影响

发布时间：2020-04-21 18:31

【摘要】：背景及目的长期以来的研究表明调节性T细胞(Tregs)对于限制效应T细胞(Teffs)的活性以及维持自身免疫耐受性都至关重要,体内Tregs失衡和功能障碍会导致免疫介导的疾病和组织损伤。此外,Tregs也参与各种免疫治疗的机制,从而减少致病性免疫反应。然而,目前使用的抗炎药物和免疫调节剂对Tregs的功能和稳态的影响并不完全清楚。关于白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素2受体(IL2R)的大量研究揭示了其通过影响Tregs的功能和稳态来调节免疫耐受。Tregs功能的保存或增强已经成为现代免疫治疗策略的关键组成部分。体内低剂量IL-2给药已被证实在扩增Tregs中是安全有效的,也有研究表明糖皮质激素可增强自身免疫病患者体内Tregs细胞的扩增。然而,这些免疫调节药物的共同作用对Tregs的直接影响仍然未知,在考虑到临床疾病病因、发病机制和治疗的复杂背景下,各种药物之间的反应、药物对免疫功能的影响等都将是影响疾病的因素,都提示临床应更加谨慎地解决异常免疫功能和免疫反应恢复的问题。本实验通过单独泼尼松龙以及泼尼松龙联合IL-2预处理健康人外周血PBMC,对比Tregs、Th1、Th17细胞的细胞比率,观察和分析糖皮质激素和IL-2对Treg细胞、Th1/Th17细胞的影响,并且还进一步分析其对Treg细胞亚群的影响。方法取健康人外周血,经处理获得淋巴细胞,实验分为泼尼松龙处理组(GC组)、泼尼松龙+高剂量IL-2处理组(GC+IL-2hi组)、泼尼松龙+低剂量IL-2处理组(GC+IL-2low组)和阴性对照组(control组),处理4天后,按多色分析法进行染色,用流式细胞仪检测并分析Treg(CD3+CD4+Foxp3+)细胞频率、Th1(CD3+CD4+foxp3-IFNγ+IL17-)细胞频率和Th17(CD3+CD4+foxp3-IL17+IFNγ-)细胞频率变化,进一步对Treg细胞进行分群后各群细胞频率的变化。结果1、Treg细胞频率:发现较control组,GC组显著降低(p0.001),GC+IL-2hi组、GC+IL-2low组显著升高(p值分别为0.001、0.001);较GC组,GC+IL-2hi组与GC+IL-2low组显著升高(p0.001),GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组对比,IL-2low组高于IL-2hi组(p0.05)。2、Th1细胞频率:与control组对比,GC组、GC+IL-2hi组和GC+IL-2low均显著降低(p0.001);其它组对比结果无统计学意义。3、Th17细胞频率:与control组对比,GC组、GC+IL-2hi组和GC+IL-2low均降低(p0.05);其它组对比结果无统计学意义。4、Treg细胞分群:(1)active Tregs群细胞频率:与control组比较,GC组降低(p0.001),GC+IL-2hi组升高(p0.05),GC+IL-2low组显著升高(p0.001);与GC组比较,GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著增高(p0.001);GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组之间比较,IL-2low组显著高于IL-2hi组(p0.001)。(2)resting Tregs群细胞频率:与control组比较,GC+IL-2hi组升高(p0.05);与GC组比较,GC+IL-2low组显著降低(p0.001);GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组之间比较,IL-2low组细胞频率较IL-2hi组细胞频率显著降低(p0.001)。(3)non-Tregs群细胞频率:与control组比较,GC组升高(p0.05),GC+IL-2hi组降低(p0.05),GC+IL-2low组显著降低(p0.001);与GC组比较,GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著降低(p0.001);GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组之间比较,IL-2low组显著低于IL-2hi组(p0.001)。5、CD25的平均荧光强度:与control组比较,GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著升高(p0.001);与GC组对比,GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著升高(p0.001)。6、CD39的平均荧光强度:与control组比较,GC组明显降低(p0.001),GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著升高(p0.001);与GC组对比,GC+IL-2hi组和GC+IL-2low组均显著升高(p0.001)。结论1、泼尼松龙体外短期处理显著抑制Treg细胞,主要抑制有免疫调节活性的active Treg群,并改变Th1/Th17与Treg细胞平衡。2、IL-2对于Treg细胞具有显著的增殖效应,且可以逆转由泼尼松龙导致的Treg细胞抑制效应。
【图文】：

各组的Tregs细胞比率示意图

Th1、Th17 细胞特征性流式散点图见图1.2。经过流式细胞仪分析细胞，，首先我们对比了四组的 Treg 细胞的频率（见表2），发现较 control 组，GC 组的 foxp3+Treg 细胞频率显著降低（p<0.001），GC+IL-2hi 组、GC+IL-2low 组 foxp3+Treg 细胞频率显著升高（分别为 p=0.001，p=0.0001）；较 GC 组，GC+IL-2hi 组与 GC+IL-2low 组 Treg 细胞频率显著升高（p<0.001），差异均具有统计学意义；IL-2 刺激组之间对比
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392

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本文编号：2635568