SAMHD1蛋白结构域影响Vpx蛋白诱导降解的机制研究

发布时间：2017-03-23 18:16

  本文关键词：SAMHD1蛋白结构域影响Vpx蛋白诱导降解的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：人源SAMHD1(sterile alpha motif and HD domain-containing protein-1)是一种潜在的抗HIV-1病毒,HIV-2病毒和SIV病毒的抗病毒因子。HIV-2病毒和一些SIV病毒可以编码病毒辅助蛋白Vpx,它可以介导以Vpx-DCAF1为基础的E3泛素连接酶复合体降解SAMHD1蛋白。尽管已经报道SAMHD1的N端和C端对于Vpx诱导SAMHD1蛋白的降解十分重要,但是SAMHD1蛋白的其他结构域是否对Vpx诱导其降解功能作出贡献还尚不清楚。在我们的研究中,与人源的SAMHD1(SAMHD1HS)恰恰相反,鸡源的SAMHD1(SAMHD1GG)不会被Vpx诱导降解。为了阐明SAMHD1结构域与被Vpx诱导降解之间的关系,我们将人源和鸡源的SAMHD1蛋白按照结构域的划分,构建了一系列人源、鸡源的重组融合SAMHD1蛋白并进行功能性实验。实验结果与之前的报道一致,SAMHD1蛋白的C端对于Vpx诱导SAMHD1蛋白降解十分关键。然而,在接下来用SAMHD1单结构域替换融合蛋白降解实验揭示了其HD结构域也对Vpx的降解功能做出贡献。有趣的是,我们发现HD结构域虽然影响Vpx诱导的SAMHD1蛋白降解,但是它并不会阻碍Vpx与SAMHD1蛋白的相互结合,即含有鸡源SAMHD1蛋白HD结构域的人源SAMHD1蛋白可以与Vpx相互结合却不能被Vpx诱导降解。因此,我们的发现揭示了Vpx诱导SAMHD1蛋白降解除了必须相互结合以外,可能还需要其它因子的参与。
【关键词】：SAMHD1 Vpx HIV 泛素化依赖蛋白体途径降解
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 绪论8-13
• 1.1 获得性免疫缺陷综合症8
• 1.2 免疫缺陷病病毒8-11
• 1.2.1 HIV病毒的生命周期9-10
• 1.2.2 HIV结构和辅助蛋白10-11
• 1.2.3 辅助蛋白Vpx的发现与功能11
• 1.3 SAMHD1功能及与Vpx的关系11-13
• 第2章 材料与方法13-24
• 2.1 材料、仪器和试剂13-19
• 2.1.1 菌株与细胞13
• 2.1.2 抗体13
• 2.1.3 主要仪器13-14
• 2.1.4 主要试剂14-15
• 2.1.5 引物合成和测序15-19
• 2.2 实验方法19-24
• 2.2.1 蛋白表达载体的构建19-21
• 2.2.2 细胞复苏及细胞培养21
• 2.2.3 Vpx降解SAMHD1实验：21-22
• 2.2.4 免疫共沉淀22
• 2.2.5 荧光成像22-24
• 第3章 结果与讨论24-31
• 3.1 Vpx具有降解人源SAMHD1蛋白能力但不具备降解鸡源SAMHD1蛋白的能力24-25
• 3.2 SAMHD1GG C末端妨碍Vpx降解SAMHD125-26
• 3.3 SAMHD1的HD结构域是Vpx诱导SAMHD1降解过程中重要角色26-27
• 3.4 SAMHD1 HD结构域不影响SAMHD1-Vpx相互结合27-29
• 3.5 讨论29-30
• 3.6 结论30-31
• 参考文献31-41
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果41-42
• 致谢42-43

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