【摘要】：目的:观察Notch信号通路在不同时间高氧暴露和降钙素基因相关肽干预后肺损伤修复的病理改变,并通过Notch信号通路部分成员Notchl、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表达水平变化,来探讨降钙素基因相关肽通过Notch信号通路对高氧肺损伤发挥保护作用及其机制。方法:将新生早产鼠暴露于95%氧,诱导高氧肺损伤模型,分为6组,即空气组、高氧组、高氧+CGRP组、高氧+MWl67组、高氧+CGRP+CGRP8-37组、高氧+CGRP+MWl67组。通过HE染色,光镜下观察各组第3、7、14d肺组织病理学改变,得出肺损伤病理评分变化,并应用免疫组化法检测肺组织中Notch1的分布及表达变化,同时应用Western blot、Q-PCR法检测各组肺组织中Notch1、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表达水平变化。结果:1、各组肺组织病理改变:(1)空气对照组:第3、7、14d肺组织结构较规整,细胞排列整齐。(2)高氧组:第3d可见少许炎性细胞;第7d肺泡间隔明显断裂,间质水肿,肺泡融合;第14d肺组织气管、血管广泛破坏,管壁增厚。(3)高氧+MWl67组:高氧暴露第3d肺组织可见肺泡间隔断裂,肺泡融合;第7d可见明显炎性细胞浸润,大量空泡,间质水肿。第14 d可见毛细血管广泛破坏,气管管壁明显增厚。(4)高氧+CGRP组:CGRP干预后高氧暴露第3d气管、血管基本正常;第7d可见肺泡间隔断裂,肺泡融合,伴炎性细胞浸润;第14d可见纤维增生,气管、血管管壁增厚。(5)高氧+CGRP+CGRP8-37组:高氧暴露第3d可见肺泡间隔少量断裂,肺泡融合,炎性细胞浸润;第7d可见大量空泡,肺泡间质水肿,炎性渗出明显;第14d可见气管、血管破坏,管壁增厚。(6)高氧+CGRP+MWl67组:高氧暴露第3d肺组织可见少许炎性渗出;第7d肺泡间隔断裂,肺泡融合,间质水肿;第14d气管、血管破坏,管壁增厚。2、各组肺损伤病理评分变化:(1)高氧暴露第3、7、14d早产鼠肺损伤病理评分均高于同时间点空气组(P0.05),差异显著。且高氧组组内比较,病理评分第3d最低,第14d最高,提示病理评分与高氧暴露时间正相关。(2)高氧+MWl67组第3、7、14d肺损伤病理评分均高于同时间点高氧组(P0.05),差异显著。(3)高氧+CGRP组第3、7、14d肺损伤病理评分均低于同时间点高氧组(P0.05),差异显著。(4)高氧+CGRP+CGRP8-37组第3、7、14d肺损伤病理评分均高于同时间点高氧+CGRP组(P0.05),差异显著。(5)高氧+CGRP+MWl67组第3、7、14d肺损伤病理评分均高于同时间点高氧+CGRP组(P0.05),差异显著。(6)高氧+CGRP+MWl67组第3、7、14d肺损伤病理评分低于同时间点高氧组(P0.05),差异显著。3、免疫组化检测Notch1的分布及表达变化:Notch1在下气道和肺泡上皮细胞、血管内皮细胞均有表达,主要分布在气道上皮细胞中。高氧组第3、7、14d比同时间点空气组Notch1表达阳性细胞减少。高氧+MW167组第3、7、14d比同时间点高氧组Notch1阳性细胞减少。高氧+CGRP组第3、7、14d比同时间点高氧组Notch1阳性细胞增加。高氧+CGRP+CGRP8-37组第3、7、14d比同时间点高氧+CGRP组Notch1阳性细胞减少。高氧+CGRP+MW167组第3、7、14d比同时间点高氧+CGRP组Notch1阳性细胞减少。4、Western blot、Q-PCR法检测各组肺组织中Notch1、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表达水平变化:(1)高氧组第3、7、14d比同时间点空气组Notchl、heRP、Hes表达降低(P0.05),差异显著。(2)高氧+MWl67组第3、7、14d比同时间点高氧组Notchl、heRP、Hes表达进一步降低(P0.05),差异显著。(3)高氧+CGRP组第3、7、14d比同时间点高氧组Notch1、heRP、Hes表达增加(P0.05),差异显著。(4)高氧+CGRP+CGRP8-37组第3、7、14d比同时间点高氧+CGRP组Notch1、heRP、Hes表达下降(P0.05),差异显著。(5)高氧+CGRP+MW167组第3、7、14d比同时间点高氧+CGRP组Notch1、Hes、heRP表达下降(P0.05),差异显著。高氧+CGRP+MW167组第3、7、14d比同时间点高氧组Notch1、heRP、Hes表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、高氧暴露后,Notch1、heRP、Hes表达下调,肺组织出现病理损伤改变,说明Notch信号通路参与了BPD的发生发展。2、CGRP可明显减轻高氧暴露后早产鼠肺组织病理损伤程度,说明CGRP可能是机体高氧肺损伤的保护性因子。3、CGRP可能通过促进Notch信号的表达对高氧肺损伤发挥保护效应。并且,Notch信号通路可能只是CGRP对高氧肺损伤发挥效应的其中一条途径。
【图文】：
图 2.1 不同时间高氧暴露后各组肺组织病理改变(HE 染色，×200，n=6)2.3.2.2 各组肺损伤病理评分（1）高氧暴露第 3、7、14d 的早产鼠肺损伤病理评分均高于同时间点空气对照组（p＜0.05），，差异有统计学意义。且高氧组组内相比较，肺损伤病理评分
图 2.3 各组肺组织 Notch1 表达变化（免疫组化，×20，n=6）2.3.4 Western blot 分析不同时间高氧暴露后各组早产鼠肺组织中Notchl、heRP、Hes 蛋白含量的变化
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R722.6;R-332
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