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酒精引起C57仔鼠脊髓神经元的损伤及其机制的研究

发布时间:2020-05-01 23:19
【摘要】:目的:为探讨酒精暴露对于仔鼠脊髓前角及后角神经元是否造成损伤作用,展开了我们的初步研究。方法:将出生后4d小鼠随机分为两组,即对照(Control)组、酒精(Alcohol)组。酒精组根据体重比行酒精皮下注射,对照组则按体重比注射生理盐水,2h后重复一次;出生第6d相同时间按上述步骤再次注射,2h后解剖并留取完整脊髓组织,进行免疫组化染色、免疫荧光染色、Western Blot相关检测。另一部分小鼠待成年后进行相应检测。结果:1.酒精暴露可引起仔鼠脊髓Caspase 3阳性细胞显著增多(P0.01),即脊髓神经元凋亡增强。免疫组化图片上显示脊髓前角、后角都存在相应的Caspase 3表达上调。免疫荧光图片显示酒精造成了PD6仔鼠神经元凋亡数量升高。2.酒精暴露可导致仔鼠脊髓前角Ch AT阳性神经元的数量下降及脊髓后角GAD67阳性神经元的数量减少,免疫荧光双标结果可知损伤的细胞类型为Ch AT阳性和GAD67阳性神经元,而免疫组化图片也表现了Ch AT、GAD67的分布区域。Western Blot结果表现出Ch AT、GAD67蛋白灰度值下降(P0.05)。3.酒精暴露可引起仔鼠脊髓GFAP、Iba1表达上升,即酒精引起了仔鼠脊髓的炎症反应,胶质细胞呈活化状态。免疫组化图片中,酒精组脊髓弥漫分布了更密集的GFAP阳性神经元(P0.05),而免疫荧光图片表现得更加明显(P0.01)。Iba1的表达在免疫组化和免疫荧光图片中都显示出更为明显的增加(P0.01)。4.酒精暴露可导致成年鼠脊髓神经元数量下降,如免疫组化图示(P0.01)。5.酒精暴露可引起成年鼠脊髓前角Ch AT阳性神经元的平均面积减少(P0.01)及脊髓后角GAD67阳性神经元的数量减少(P0.01),Western Blot也有同样体现。6.酒精暴露可导致仔鼠和成年鼠脊髓SUFU、Shh、Islet1蛋白的表达下降(P0.05)。结论:1.酒精引起仔鼠脊髓神经元凋亡,表现为胆碱能神经元、GABA能神经元的减少。2.酒精引起仔鼠脊髓炎症反应,胶质细胞增生。3.酒精引起成年鼠脊髓神经元数量减少,为胆碱能神经元、GABA能神经元减少。4.酒精引起的胆碱能神经元和GABA能神经元的发育障碍、数量减少可能与Sonic hedgehog信号通路的抑制及Islet1的表达下调有关。
【图文】:

仔鼠,酒精,脊髓神经元,对照组


图 1 酒精引起 C57 仔鼠脊髓神经元凋亡,标尺示 100μm,下同,** P<0.01A-C:对照组和酒精组 C57 仔鼠 cleaved-Capase 3 免疫组化染色,D-G:对照组和酒精组 C57仔鼠 NeuN 和 cleaved-Capase 3 免疫荧光双标Fig. 1 Alcohol caused neuroapoptosis in the spinal cord of C57 pups. Bar = 100 μm ( The same asbelow). ** P<0.01.A-C:IHC staining of cleaved-Capase 3 in the control and the alcohol group of C57 pups,D-G:Immunofluorescence double label staining of NeuN and cleaved-Capase 3 in the control andthe alcohol group of C57 pups. ** denotes significant difference (p <0.01).4.2 酒精引起 C57 仔鼠脊髓 ChAT 阳性神经元数量减少酒精使得仔鼠脊髓 ChAT 阳性神经元数量锐减(图 2A,2B)。免疫荧光染色显示出 ChAT 阳性神经元发生了凋亡(图 2D,2E,2F),证明了酒精对于仔鼠脊髓 ChAT 阳性神经元的损伤作用。Western Blot 结果也同样如此。

仔鼠,酒精,对照组,脊髓


21图 2 酒精引起 C57 仔鼠脊髓 ChAT 阳性神经元数量减少,*P <0.05,** P <0.01A-C:对照组和酒精组 C57 仔鼠 ChAT 免疫组化染色,,D-F:对照组和酒精组 C57 仔鼠 ChAT和 cleaved-Capase 3 免疫荧光双标,G-H:ChAT 蛋白 Western Blot 结果Fig. 2 Alcohol caused ChAT-positive neuron loss in the spinal cord of C57 pups. *P <0.05.A-C:IHC staining of ChAT in the control and the alcohol group of C57 pups,D-F:Immunofluorescence double label staining of ChAT and cleaved-Capase 3 in the control and thealcohol group of C57 pups, G-H:Western Blot analysis of ChAT. The expression of the protein wasquantified and normalized to the expression of β-actin. Each data point was the mean ± SEM ofthree independent experiments. * denotes significant difference (p <0.05). ** denotes significantdifference (p <0.01).
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R338

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本文编号:2647176

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