鼻咽癌耐顺铂细胞模型建立,耐药基因筛查及与IAP-1致耐药相关系列研究
发布时间:2020-05-12 04:32
【摘要】:(1)研究目的鼻咽癌是一种原发于鼻咽部的常见头颈部恶性肿瘤,广东等地区尤为高发。由于发病部位隐蔽,早期患者难以及时发现,鼻咽部有大量的淋巴引流,所以大多数患者首先表现为颈部淋巴结转移。近几十年来,虽然治疗方法的不断改进,但Ⅳ期患者5年生存率仅约65%。远处转移或个体异质性耐药的原因导致鼻咽癌仍有约10%-20%的复发率。即使在同步放化疗后,大部分T3或T4期患者的总生存率依旧相对较低。原发和继发性的耐药限制了治疗药物的选择。然而,关于复发或者转移性鼻咽癌具体是通过何种机制产生的耐药目前仍然不是很清楚。因此,明确鼻咽癌的耐药机制将有助于制定合适的治疗方案,从而提高患者的生存率和改善生活质量。(2)研究方法采用顺铂剂量逐步递加法分别诱导鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-2,建立了两株鼻咽癌顺铂耐药细胞系(HNE-1/DDP和CNE-2/DDP),通过皮下种瘤法建立了荷两种瘤裸鼠模型,并通过细胞生物学的方法研究了耐药细胞增殖、迁移、凋亡、克隆等生物学特征。在此基础上分别对耐药细胞系和亲本细胞系进行了mRNA测序,并对测序结果进行了生物信息分析,筛选出几个与顺铂耐药高度相关的通路和基因。通过在亲代细胞系中过表达,在耐药细胞系中沉默显著差异表达基因(DEGs),体内外实验进一步验证了鼻咽癌顺铂耐药发生高度相关的基因,并初步探讨了其在耐药形成机制中可能的作用。(3)研究结果成功诱导建立的鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/DDP和CNE-2/DDP对顺铂耐药指数(RI)分别为12.02和16.02,细胞凋亡减少,但迁移、克隆、增殖等能力无明显改变。HNE-1实验组共发现15403组差异表达基因,其中948组表现出显著差异(458组为过表达差异表达基因)。我们发现在所有显著差异表达基因中有9组差异表达基因与经典的铂类耐药通路相关,其中有3组差异表达基因(ATM,IAP-1,IAP-2)也出现在本次研究的生信分析结果的前5大差异表达通路中。而其中IAP-1拥有最高的log2比值(log2比值,4.22;概率,0.95)。经体外实验验证,耐药细胞系中IAP-1表达升高引起顺铂在样本中的半数致死量(IC50)升高,细胞凋亡减少,细胞增殖、克隆和迁移能力下降。此外体内实验证明高表达的IAP-1减缓了肿瘤生长速度,但也降低了肿瘤对顺铂的敏感性,减弱了药物的疗效。(4)研究结论体外和体内实验表明,表达升高的IAP-1在鼻咽癌顺铂耐药中发挥重要作用,且其生物学功能的改变与临床数据具有一致性。结合开放数据源的分析结果,表达升高的IAP-1与较差的5年存活率、更高的复发率和更高的肿瘤组织细胞分型相关。总之,IAP-1表达升高与顺铂化疗反应较差和不良预后相关,提示IAP-1可以作为一个新的鼻咽癌预后指标,并且可能是一个潜在的可以改善顺铂化疗敏感性的治疗靶点。
【图文】:
逑95%邋CI:-41.49邋to-13.17)。此外,我们设计了一个划痕实验来检测细胞的迁移能逡逑力,其差异结果显示没有显著的统计学意义(图3-1F,,G)(HNE-lvsHNE-l/DDP逡逑P值=0?10(>0.05);CNE-2vsCNE-2/DDPP值=0.70(>0?05))。逡逑综上所述,与亲代细胞系相比,耐药的鼻咽癌细胞系凋亡率降低,对顺铂逡逑的IC50值升高,其他生物学功能无显著差异。我们想知道这两株耐药鼻咽癌细逡逑胞系在体内的生物学功能变化是否与体外的一致或有差异,所以我们进行了下逡逑一步体内实验来加以验证。逡逑表3-1不同鼻咽癌细胞耐药指数逡逑IC50/0ig/ml)逦耐药指数逦IC50/0ig/ml)逦耐药指数逡逑药物名称逦HNE-l/D邋Resistance逦CNE-2/D邋Resistance逡逑HNE-1逦CNE-2逡逑DP逦Index,邋RI逦DP逦Index,邋RI逡逑顺铂逦0.594逦7.08逦12.02逦0.453逦21.341逦16.02逡逑紫杉醇逦0.16逦0.161逦1.01逦0.079逦0.522逦6.61逡逑五氟尿嘧啶逦0.539逦0.55逦1.02逦0.728逦0.933逦1.28逡逑表3-2不同鼻咽癌细胞耐药稳定性逡逑IC50/(ng/ml)逦耐药指数逦IC50/(fig/ml)逡逑逦邋逦邋耐药指数逡逑时间点逦Resistance逡逑HNE-1邋HNE-l/DDP逦CNE-2邋CNE-2/DDP邋Resistance邋Index,邋RI逡逑Index,邋RI逡逑建株
相似(P邋值=0.1873邋(>0.05),邋95%邋CI:邋-60.00邋?13.09)(图邋3-2D),差异无显著统计学逡逑意义。这些结果说明即使在体内,耐药的鼻咽癌细胞系也表现出了较强的顺铂逡逑耐受性。如图3-2所示,HNE-1/DDP细胞系在体内虽然生长较缓慢,但其对顺逡逑铂的耐受性较强。两组小鼠的体重变化在治疗前后均无显著差异(治疗前P值逡逑=0.2318邋(>0.05),95%邋CI:邋-3.417邋?1.484;治疗后邋P邋值二0.9447邋(>0.05),95%邋CI:逡逑-1.798?1.864。上述结果表明,HNE-1/DDP细胞系在体内对顺铀也表现出了较逡逑强的抵抗性。但鼻咽癌细胞对顺铂耐药的具体发生机制我们仍然不是很清楚。逡逑因此,我们下一步进行了一个高通量的测序分析来研究这个问题。逡逑24逡逑
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R739.63;R-332
【图文】:
逑95%邋CI:-41.49邋to-13.17)。此外,我们设计了一个划痕实验来检测细胞的迁移能逡逑力,其差异结果显示没有显著的统计学意义(图3-1F,,G)(HNE-lvsHNE-l/DDP逡逑P值=0?10(>0.05);CNE-2vsCNE-2/DDPP值=0.70(>0?05))。逡逑综上所述,与亲代细胞系相比,耐药的鼻咽癌细胞系凋亡率降低,对顺铂逡逑的IC50值升高,其他生物学功能无显著差异。我们想知道这两株耐药鼻咽癌细逡逑胞系在体内的生物学功能变化是否与体外的一致或有差异,所以我们进行了下逡逑一步体内实验来加以验证。逡逑表3-1不同鼻咽癌细胞耐药指数逡逑IC50/0ig/ml)逦耐药指数逦IC50/0ig/ml)逦耐药指数逡逑药物名称逦HNE-l/D邋Resistance逦CNE-2/D邋Resistance逡逑HNE-1逦CNE-2逡逑DP逦Index,邋RI逦DP逦Index,邋RI逡逑顺铂逦0.594逦7.08逦12.02逦0.453逦21.341逦16.02逡逑紫杉醇逦0.16逦0.161逦1.01逦0.079逦0.522逦6.61逡逑五氟尿嘧啶逦0.539逦0.55逦1.02逦0.728逦0.933逦1.28逡逑表3-2不同鼻咽癌细胞耐药稳定性逡逑IC50/(ng/ml)逦耐药指数逦IC50/(fig/ml)逡逑逦邋逦邋耐药指数逡逑时间点逦Resistance逡逑HNE-1邋HNE-l/DDP逦CNE-2邋CNE-2/DDP邋Resistance邋Index,邋RI逡逑Index,邋RI逡逑建株
相似(P邋值=0.1873邋(>0.05),邋95%邋CI:邋-60.00邋?13.09)(图邋3-2D),差异无显著统计学逡逑意义。这些结果说明即使在体内,耐药的鼻咽癌细胞系也表现出了较强的顺铂逡逑耐受性。如图3-2所示,HNE-1/DDP细胞系在体内虽然生长较缓慢,但其对顺逡逑铂的耐受性较强。两组小鼠的体重变化在治疗前后均无显著差异(治疗前P值逡逑=0.2318邋(>0.05),95%邋CI:邋-3.417邋?1.484;治疗后邋P邋值二0.9447邋(>0.05),95%邋CI:逡逑-1.798?1.864。上述结果表明,HNE-1/DDP细胞系在体内对顺铀也表现出了较逡逑强的抵抗性。但鼻咽癌细胞对顺铂耐药的具体发生机制我们仍然不是很清楚。逡逑因此,我们下一步进行了一个高通量的测序分析来研究这个问题。逡逑24逡逑
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R739.63;R-332
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5 叶浩昕;范绍
本文编号:2659660
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