孤儿受体Nr4a对滤泡辅助型T细胞分化和功能的影响探究

发布时间：2017-03-25 12:01

  本文关键词：孤儿受体Nr4a对滤泡辅助型T细胞分化和功能的影响探究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：生物体清除病原体的过程中,淋巴细胞从初级淋巴器官发育成熟后归巢至次级淋巴器官,在次级淋巴器官中发生免疫反应。生发中心(Germinal Center,GC)是机体形成高亲和力抗体抵抗外界微生物感染的必要条件。正常的GC反应需要一类特异分化的CD4+T细胞提供辅助信号。这群CD4+T细胞受抗原呈递细胞刺激活化后迁移至滤泡区,辅助B细胞形成GC,因此被命名为滤泡辅助型T细胞(Follicular helper T cells,Tfh cells)。目前,关于CD4+T细胞如何分化成为Tfh细胞以及Tfh细胞调节GC反应的机制中还有诸多亟待解决的问题。本论文探讨一类孤儿受体家族分子,Nr4a,在Tfh细胞分化和辅助GC反应过程中的功能。首先结合流式分选和萤光定量PCR技术,我们检测Nr4a孤儿受体在Tfh细胞的表达情况;同时利用T细胞体外培养技术,检测Nr4a孤儿受体在CD4+T细胞活化过程中表达谱;再以小鼠过继转移模型为工具,从过量表达以及基因敲除Nr4a孤儿受体两方面研究Nr4a在Tfh细胞分化和辅助GC反应过程中的功能,包括生发中心B淋巴细胞与滤泡辅助性T淋巴细胞的分化情况。我们的研究结果指出,Nr4a孤儿受体在Tfh细胞中显著性高表达,并且Nr4a在CD4+T细胞活化早期立即上调。过表达Nr4a孤儿受体并过继转移至小鼠模型的结果表明,Nr4a孤儿受体会降低T细胞扩增能力,同时会显著提高T细胞辅助GC反应的能力。另一方面,同时在CD4+T细胞上特异性敲除所有Nr4a孤儿受体并不影响Tfh细胞分化和辅助GC反应的能力。这些实验结果表明Nr4a孤儿受体可以提升Tfh细胞辅助GC反应的功能,但并非是体内Tfh细胞功能所必需的因素。
【关键词】：Nr4a孤儿受体 滤泡辅助型T细胞 生发中心
【学位授予单位】：清华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 主要符号对照表8-9
• 第1章 引言9-16
• 1.1 滤泡辅助型T细胞的分化和功能9-11
• 1.2 孤儿受体Nr4a家族11-12
• 1.3 孤儿受体Nr4a家族在免疫系统中的功能12-13
• 1.4 本论文的目的和意义13-14
• 1.5 本论文的主要研究Qg容14-16
• 第2章 Nr4a受体在Tfh细胞的表达分析16-28
• 2.1 本章引论16
• 2.2 实验材料与方法16-24
• 2.2.1 主要试剂16-17
• 2.2.2 主要仪器17
• 2.2.3 主要试剂的配置17-18
• 2.2.4 主要实验动物18
• 2.2.5 实验方法18-24
• 2.2.5.1 原代淋巴细胞的制备18-19
• 2.2.5.2 原代T淋巴细胞的磁珠分离19
• 2.2.5.3 淋巴细胞的过继转移和小鼠免疫19-20
• 2.2.5.4 淋巴细胞的免疫荧光标记与流式分选20-21
• 2.2.5.5 T淋巴细胞体外活化培养和收集21
• 2.2.5.6 m RNA的提取与RT-PCR21-23
• 2.2.5.7 实时荧光定量PCR23-24
• 2.3 实验结果24-26
• 2.3.1 Nr4a家族分子在Tfh细胞亚群的表达情况24-25
• 2.3.2 Nr4a家族分子T细胞活化过程中的表达情况25-26
• 2.4 讨论26-28
• 第3章 Nr4a家族分子T细胞活化过程中的表达情况28-44
• 3.1 本章引论28-29
• 3.2 实验材料与方法29-37
• 3.2.1 主要试剂29-31
• 3.2.2 主要仪器31
• 3.2.3 主要试剂的配置31-33
• 3.2.4 主要实验动物33
• 3.2.5 实验方法33-37
• 3.2.5.1 基因克隆及表达载体构建33-35
• 3.2.5.2 反转录病毒的制备35-36
• 3.2.5.3 初始淋巴细胞的磁珠分选，，培养与感染36
• 3.2.5.4 感染的T细胞的流式分选36-37
• 3.2.5.5 淋巴细胞的过继转移37
• 3.2.5.6 淋巴细胞免疫荧光标记与流式分析37
• 3.3 结果37-42
• 3.3.1 Nr4a过表达系统的建立37-38
• 3.3.2 体内检测Nr4a过表达T细胞分化成为Tfh细胞的能力38-40
• 3.3.3 Nr4a过表达对Tfh细胞辅助GC反应的能力的影响40-42
• 3.4 讨论42-44
• 第4章 Nr4a基因缺陷T细胞的Tfh分化和功能44-54
• 4.1 本章引论44-45
• 4.2 实验材料与方法45-50
• 4.2.1 主要试剂45-46
• 4.2.2 主要仪器46
• 4.2.3 主要试剂的配置46
• 4.2.4 主要实验动物46-47
• 4.2.5 实验方法47-50
• 4.2.5.1 小鼠基因组DNA的制备与基因型鉴定47-48
• 4.2.5.2 初始淋巴细胞的磁珠分离48
• 4.2.5.3 T淋巴细胞运动的体外培养和感染标记48-49
• 4.2.5.4 感染的T细胞的流式分选49
• 4.2.5.5 骨髓嵌合体小鼠模型建立49-50
• 4.3 实验结果50-53
• 4.3.1 T细胞特异性Nr4a全敲除小鼠表型和配种50-51
• 4.3.2 Nr4a-TKOOT-2 骨髓嵌合体小鼠模型建立51-52
• 4.3.3 Nr4a缺陷对Tfh细胞分化和辅助功能影响的分析52-53
• 4.4 讨论53-54
• 第5章总结和展望54-56
• 5.1 工作总结54
• 5.2 工作展望54-56
• 参考文献56-63
• 致谢63-65
• 附录65-67
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果67

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