追风透骨胶囊对脊髓损伤模型大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响及其机制的研究

发布时间：2020-05-26 02:46

【摘要】：研究背景脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种中枢神经系统创伤性疾病。20 1 1年部分省市调查结果显示SCI发病率为23.7-60.6例/百万人[1-2]。脊髓损伤后多出现肢体感觉和运动障碍,严重影响患者生活质量,给患者和社会带来沉重负担。因此调节脊髓损伤引起的脊髓神经元凋亡水平,促进脊髓节段神经传导功能,缓解临床症状非常重要[2-4]。SCI后的非手术干预手段中主要有物理治疗和药物治疗,其中药物治疗以恢复脊髓血供,减轻脊髓组织水肿等方式减轻临床症状。追风透骨胶囊已经广泛地应用于临床,同时相关病例对照研究证实了其减轻患者临床症状的疗效,但目前具体分子机制尚不清楚。目的探讨追风透骨胶囊对急性脊髓损伤可能存在的保护脊髓神经细胞、降低损伤后神经元炎症及凋亡水平的具体机制,为临床治疗SCI提供新的靶点。方法本研究应用SPF级SD大鼠45只,雌性,8～10周,体重250±10g,根据体重由小到大,采用随机数字法将实验大鼠分成3组:假手术组、脊髓损伤组和治疗组。其中,假手术组咬除T10节段的椎板,但不破坏硬脊膜下的脊髓。在脊髓损伤组中,在假手术组基础上,通过Allen's方法使用脊髓打击器击打T10节段脊髓。术后腹腔注射PBS溶液(20mg/kg),治疗组建立模型过程同脊髓损伤组,术后腹腔注射追风透骨胶囊药物溶液(20mg/kg)。在成功建立模型后第1d、3d、7d、14d和28d进行大鼠行为学试验(Basso,Beattie,Bresnahan locomotor rating scale,BBB评分)评价大鼠肢体运动功能。通过光学显微镜观察每个实验组中神经元染色后脊髓前角中的运动神经元的数量。采用统计学方法分析,从而讨论追风透骨胶囊对脊髓神经元数量的影响。随后采用Western blot法观察β-catenin,LRP-6和active Caspase-3表达情况以验证追风透骨胶囊保护脊髓神经细胞,调控神经元凋亡水平的作用机制。结果1.造模后,假手术组死亡2只,脊髓损伤组死亡3只,治疗组死亡2只,死亡的大鼠后续补充进入对应实验组。2.假手术组BBB评分稳定在21分,与脊髓损伤组相比,造模后第7d和第14d BBB评分分别为5.93±0.59、10.93±1.03,治疗组运动功能改善,行为评分增加(P0.05),建模后28d BBB评分12.33±0.49,明显升高(P0.01)。3.造模后第7d,与假手术组相比,治疗组胞浆内尼式小体数量显著增加(P0.05),提示脊髓神经细胞数量显著恢复。4.与脊髓损伤组相比,治疗组β-catenin及LRP-6蛋白的表达显著增加(P0.01),active Caspase-3表达水平明显降低(P0.01)。结论1.追风透骨胶囊药物溶液浓度为20mg/kg时,可显著促进脊髓损伤模型大鼠肢体运动功能的恢复。2.追风透骨胶囊可以提高脊髓损伤模型大鼠脊髓神经元的数量。3.追风透骨胶囊可以通过β-连环蛋白信号通路抑制受损神经元产生的细胞凋亡,从而保护脊髓神经元。
【图文】：

评分（表丨）。大鼠运动评分结果显示：Ｓｈａｍ组ＢＢＢ行为学评分从第３ｄ稳定在２１分，肢体运动功能基本恢复至正常水平。Ｖｅｈｉｃｌｅ组术后卜３ｄ不动，肌力0级，仅能观察到卜肢髋或膝关节轻微活动，第７ｄ开始下开始恢复，第７ｄ、１４ｄ、２８ｄ评分分别为：２．０７±０．４６、４．６０±０．６３、４．ＺＦＴＧ组术后ｌ－３ｄ，双下肢刺激偶尔可动，肌力０－丨级，，俯卧位行走，尿逡逑７ｄ的恢复明显优于Ｖｅｈｉｃｌｅ组。第７、１４、２８ｄ评分分别为：５．９３±０．５９、逡逑１．０３、１２．３３土０．４９邋（表２），ＺＦＴＧ组分数曲线呈上升趋势（图１），因此相比，ＺＦＴＧ组的分数分别在损伤后第７ｄ，１４ｄ增加（ＰＣ０．０５），第２８ｄ高（Ｐ＜０．0ｌ），具有统计学意义，这说明ＺＦＴＧ对ＳＣＩ模型大鼠的运动着密切的联系。逡逑

表２各组大鼠的行为学测试分数（７±ｓ）逡逑术后天数逡逑别逡逑Ｉｄ逦３ｄ逦７ｄ逦１４ｄ逦２８ｄ逡逑ｅｈｉｃｌｅ邋０．２０±０．４４逦ｌ．８０±０．５６逦２．０７±０．４６逦４．６０±０．６３逦４．８０±０．６２逡逑ＦＴＧ邋０．２７±０．４６逦２．１３±０．７４逦５．９３邋±０．５９逦１０．９３±１．０３逦１２．３３±０．４９逡逑邋值逦尸＞０．０５邋尸＞０．０５逦Ｐ＜０．０５逦Ｐ＜０．０５邋尸＜０．０１逡逑
【学位授予单位】：沈阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R651.2;R-332

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本文编号：2681163