老年相关性NADPH-diaphorase阳性硕变神经纤维在狗和猴腰骶脊髓中的研究

发布时间：2020-05-29 05:22

【摘要】：目的探究老年腰骶脊髓中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase,NADPH-d)反应,进一步确定老年大鼠腰骶脊髓中出现的NADPH-d阳性异常结构是否出现在狗和非人灵长类动物的腰骶脊髓。方法实验选取年轻(小于2年)和老年(10年以上)两种性别的家狗各8只,年轻(小于5年)和老年(15年以上)两种性别的食蟹猴各8只。这些动物在实验前都是健康的并且无任何神经系统缺陷。狗脊髓组织分别进行NADPH-d组织化学染色,NADPH-d组织化学染色复合NeuN,CGRP,VIP,GFAP免疫荧光双标,以及骶段脊髓切片进行VIP免疫组织化学染色。猴脊髓组织分别进行NADPH-d组织化学染色,NADPH-d组织化学染色复合CGRP,VIP,NPY免疫荧光双标。结果NADPH-d组织化学染色结果显示,在老年狗和猴骶段脊髓的背角(Dorsal horn,DH),背根进入区(Dorsal root entry zone,DREZ)和灰质背连合(Dorsal gray commissure,DGC),特别是S1-S3脊髓节段利绍氏束(Lissauer's tract,LT)的外侧束通路(Lateral collateral pathway,LCP)中,发现了一种新的肿胀的纤维样NADPH-d阳性反应,将其命名为NADPH-d阳性硕变神经纤维(Megaloneurite),这与正常的NADPH-d阳性纤维完全不同。这些密集的,异常的NADPH-d硕变神经纤维发生在从背根进入区通过LT沿着DH外侧边缘到达骶副交感核(Sacral parasympathetic nucleus,SPN)和/或通过内侧束通路(Medial collateral pathway,MCP)到达DGC的区域。在老年狗和猴骶尾段脊髓横切面的DREZ和LCP外侧的白质中,检测到与正常的神经细胞和神经胶质细胞极为不同的高密度的点状NADPH-d反应,这些异常的NADPH-d反应在水平切面上呈现出与NADPH-d阳性硕变神经纤维相同的形态。在老年狗尾段中央管(Central canal,CC)内发现另一种膨大肿胀的NADPH-d阳性异常结构,这些不规则的强染的NADPH-d阳性异常结构,与正常的神经元不同,呈团块状或纤维束状出现在CC周围,被认为是NADPH-d阳性硕变神经纤维的一种变异。此外,在老年猴的薄束核也检测到密集的球形NADPH-d阳性退变结构。NADPH-d组织化学复合NeuN,CGRP,VIP,GFAP,NPY免疫荧光双标的结果表明,NADPH-d阳性硕变神经纤维在DREZ,LCP,DGC以及CC周围与VIP免疫反应发生共定位,但是不与NeuN,CGRP,GFAP,NPY免疫荧光共定位。老年狗骶段脊髓VIP免疫组化实验表明,MCP中也有少量硕变神经纤维出现。结论老年狗和猴骶段脊髓出现大量的NADPH-d阳性硕变神经纤维,其主要分布在DREZ,DGC,LCP,MCP和CC周围,不出现在颈段,胸段和上腰段脊髓。NADPH-d阳性硕变神经纤维与VIP免疫反应共定位,并且仅出现在老年动物骶段脊髓,而不出现在年轻动物中。这些硕变神经纤维可能与骶段脊髓的跨神经节纤维的肿胀有关。本实验结果提示,NADPH-d阳性硕变神经纤维可能作为一种特殊的衰老标志物,与老年盆腔脏器功能减退和疾病有关。
【图文】：

图 2 NADPH-d 反应在老年狗各脊髓节段中的分布注：A，B：老年狗颈段脊髓中的 NADPH-d 反应；C，D：老年狗胸段脊髓中的NADPH-d 反应；E，F：老年狗腰段脊髓中的 NADPH-d 反应；G，H：老年狗骶段脊髓中的 NADPH-d 反应；I：NADPH-d 反应在各脊髓节段分布模式图；绿色线条：硕变神经纤维；红色三角：白质中的异常结构；黑色圆点：NADPH-d 阳性神经元；DH：背角；LCP：外侧束通路；IML：中间外侧柱；DGC：灰质背连合；CC：中央管；空心箭头：NADPH-d 神经元；黑色长箭头：正常 NADPH-d 阳性神经纤维；黑色箭头：硕变神经纤维；标尺：A，C，E，G=200μm，B，D，F，，H=50μm。二、老年狗骶段脊髓中 GFAP，NeuN，CGRP 和 VIP 免疫反应的表达NADPH-d 组织化学复合 GFAP，NeuN，CGRP 和 VIP 免疫荧光，用于鉴定硕变神经纤维的性质。GFAP，NeuN 或 CGRP 免疫荧光未检测到与 NADPH-d 阳性硕变神经纤维相对应的结构（图 3A-I）。VIP 免疫反应与 NADPH-d 阳性

、老年狗骶段脊髓中 VIP 免疫反应的表达VIP 免疫组织化学研究表明，在老年狗骶段脊髓的 DH，DCP，观察到与 NADPH-d 组织化学染色相同的硕变神经纤维（）。同时，我们在中央管周围发现一些与室管膜细胞相接触的（图 4G-I）。此外，在 MCP 中也可以偶然检测到 VIP 阳性硕A，B）。这些 VIP 免疫反应纤维的走行与 NADPH-d 阳性硕变神表了盆腔内脏反射通路的一部分。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R322.8

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本文编号：2686464