rAlb-34k2重组蛋白粘附细菌、细胞的功能初探

发布时间：2020-05-31 17:48

【摘要】：目的:探讨白纹伊蚊雌蚊特异性唾液重组蛋白34k2(rAlb-34k2)对多种细菌粘附效应的影响,以及与DENV-2的多种靶细胞粘附效应的功能初探。方法:(1)利用免疫印迹法检测大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌与rAlb-34k2蛋白共孵育后的粘附效应;利用分光光度法检测rAlb-34k2蛋白对16h内大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的OD_(600)值的变化。(2)利用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白对DENV-2早期感染BHK-21细胞的影响;利用免疫印迹、间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、U87、Raw264.7、HaCat细胞的粘附效应以及抗体阻断的作用。结果:(1)rAlb-34k2对多种细菌粘附效应的初探:①rAlb-34k2蛋白可与大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌粘附,而不能与乙型溶血性链球菌粘附;②不同浓度rAlb-34k2蛋白(137 ng/μL、112 ng/μL)干预大肠杆菌后24h内细菌的OD_(600)值分别波动在0.063~0.294和0.097~0.349之间,与PBS对照组相比,平均抑制率分别为68.7%,66.4%(n=5),且与Ca~(2+)的存在无关。而在Ca~(2+)依赖下相应浓度的rAlb-CTL2蛋白具有促进大肠杆菌OD_(600)升高的效应,平均促进率分别为30.4%,50.3%(n=5)。③以PBS、BSA为对照,rAlb-34k2蛋白(终浓度为48 ng/μL)作用于金黄色葡萄球菌后16 h内细菌的OD_(600)值波动在0.064~1.504之间,与PBS对照组相比,平均促进率为136%,提示该蛋白具有可能一定的促金黄色葡萄球菌生长的可能(OD_(600))。(2)rAlb-34k2对DENV-2多种靶细胞粘附作用的初探:① rAlb-34k2蛋白干扰后,DENV-2感染BHK-21细胞24h内的感染比值分别为:rAlb-34k2蛋白组为0.54±0.029;热灭活rAlb-34k2蛋白组为0.40±0.023;DENV-2对照组为0.44±0.03。在蛋白水平表明rAlb-34k2蛋白在早期能促进DENV-2感染BHK-21细胞(n=13,P0.001);②免疫印迹法显示不同浓度的rAlb-34k2蛋白对BHK-21细胞有明显的粘附效应,且该效应不被抗rAlb-34k2特异性抗血清预处理后所阻断;进一步通过免疫印迹和免疫荧光法证实rAlb-34k2蛋白还可识别U87、Raw264.7及HaCat等细胞。结论:白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白可通过粘附多种细菌;同时该蛋白也可与DENV-2的多种靶细胞结合。
【图文】：

细菌粘附,蛋白,检测结果,洗脱液

注：1.菌体沉淀组；2.蛋白对照组；3.PBS末次洗脱液；4.7%SDS上清液图 1 rAlb-34k2 蛋白与不同细菌粘附的 Western blot 检测结果Fig.1 The rAlb-34k2 protein binding to different bacteria was analyzed by

分光光度法,检测结果,大肠杆菌,蛋白

图 2 大肠杆菌OD60016h的分光光度法检测结果Fig.2The OD600value of E. coli was detected by Spectrophotometric2.2.2 不同浓度的 rAlb-34k2 蛋白作用后大肠杆菌 OD600值降低图 3 表示用分光光度计法检测 16 ng/μL~137 ng/μL 不同浓度的 rAlb
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392

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