IL-33对角质形成细胞和小鼠银屑病样皮损模型的影响

发布时间：2020-06-01 16:21

【摘要】：背景银屑病是以表皮过度增生和慢性炎症为特征的皮肤病。细胞因子在银屑病的发病机制中发挥着重要的作用。IL-33是2005年发现的IL-1超家族成员之一,广泛表达于人类组织细胞上,尤其在皮肤组织上的表达最高。本课题组前期在临床银屑病标本皮损区中检测到IL-33高表达,这提示IL-33可能在银屑病的发病中扮演重要的角色。本研究进一步探讨IL-33对角质形成细胞和小鼠银屑病样皮损模型的影响,为银屑病的治疗提供新的理论依据。目的探讨IL-33对角质形成细胞(HaCaT)和小鼠银屑病样皮损模型的影响。方法不同浓度IL-33刺激HaCaT细胞,CCK8和免疫荧光检测细胞增殖,细胞荧光检测增殖,Western blot检测各组细胞中LC3、Beclin1和p-STAT3的水平,流式检测各组细胞的凋亡水平。将6~8周BALB/c雌性小鼠随机分为:正常组、IL-33组(腹腔注射IL-33)、咪喹莫特组(背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立银屑病样皮损模型)和IL-33处理组(先背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立银屑病样皮损模型,然后再腹腔注射IL-33)。使用PASI评分记录各组小鼠的皮损区变化情况,HE染色观察各组小鼠的皮损区情况,ELISA检测小鼠血清中IL-33和ST2的表达,RT-PCR检测皮损组织中IL-33和ST2的表达,Western blot检测皮损组织中自噬相关蛋白和磷酸化STAT3的表达,流式检测各组小鼠脾脏中淋巴细胞亚群的分布情况。结果1.在小鼠银屑病样皮损模型中,与对照组相比,IL-33和ST2在mRNA和蛋白水平均呈高表达状态(P0.05)。2.在小鼠银屑病样皮损模型中,使用PASI评分,与对照组和咪喹莫特组相比,从形态学和HE染色的结果表明,IL-33处理组小鼠的红斑、鳞屑及皮损厚度都明显严重(P0.05)。3.Western blot结果表明,IL-33处理组皮损中自噬相关蛋白的表达水平低于咪喹莫特组(P0.001),p-STAT3蛋白的表达水平均高于正常组和咪喹莫特组(P0.001)。4.流式结果显示,在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样模型中,与模型组相比,IL-33处理组小鼠脾脏中CD3~+CD8~+T和CD3~+CD4~+T比例明显降低(P0.05),其中CD3~+CD8~+T降低更明显(P0.001)。5.不同浓度的IL-33刺激HaCaT细胞,结果显示,25ng/mL的IL-33处理组促进HaCaT细胞的增殖作用最明显(P0.05);细胞荧光Ki67染色也表明,25ng/mL的IL-33处理组HaCaT细胞的增殖作用明显(P0.05);但是IL-33对细胞的凋亡没有差异。6.在不同浓度IL-33刺激HaCaT细胞,Western blot结果表明,IL-33可促进LC3、Beclin1和p-STAT3蛋白的表达(P0.05)。结论1.IL-33和ST2高表达在小鼠银屑病样皮损组织。2.IL-33促进HaCaT细胞的增殖,诱导自噬和STAT3的磷酸化。3.IL-33加重咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的发生和发展,可能的机制是抑制自噬,促使STAT3的磷酸化来实现的。
【图文】：

细胞,自噬,咪喹莫特,银屑病

(A)The proportion of CD4+and CD8+T cells in mouse spleen. (B and C)Statistical Analysis. **p< 0.01 and***p< 0.001.compared with IMQ group.图 3 IL-33 对小鼠脾脏中 CD3+CD4+T 细胞和 CD3+CD8+T 细胞比例的影响Figure3.The effect of IL-33 on the ratio of CD3+CD4+T cells and CD3+CD8+Tcells in mouse spleen.2.4 IL-33 抑制自噬相关蛋白和促使 STAT3 磷酸化的表达IL-33 加重小鼠的银屑病样症状，，但是具体的作用机制依然不清楚。因此我们通过检测自噬相关蛋白，来观察 IL-33 对其的影响。结果表明，IL-33 处理组与咪喹莫特组相比，LC3 的蛋白表达水平降低（P< 0.001）；Beclin1 的蛋白表达水平也降低（P<0.001）。同时，在研究中也发现，与咪喹莫特组相比，IL-33 处理组的 STAT3没有差异，但是 p-STAT3 的蛋白表达水平升高（P< 0.05）；与对照组相比，p-STAT3蛋白也升高（P< 0.01）。因此，我们猜测 IL-33 加重小鼠的银屑病样症状可能是通过对自噬的抑制，同时活化 STAT3 来引起的。（图 4）

(A)The western blot results of eachprotein expression. ***p< 0.001.comp图 4 IL-33 抑制自噬相关Figure4. IL-33 inhibited autophphosph2.5 IL-33 促进 HaCaT 细胞的增殖IL-33 在 25～100ng/mL 时促进细胞显，与未处理组相比（P< 0.01）。HaCa用 Ki67 细胞荧光染色结果显示，细胞的
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.63;R-332

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