Gulo通过抑制Six2调控后肾间充质细胞增殖、凋亡和MET

发布时间：2020-06-03 10:29

【摘要】：目的:研究L-古洛糖酸-γ-内酯氧化酶(L-gulono-γ-lactone oxidase,Gulo)在C57BL/6小鼠胚胎肾脏中的表达,以及对后肾间充质(metanephric mesenchyme,MM)细胞增殖、凋亡、间质-上皮转化(mesenchymal-to-epithelial transformation,MET)过程的影响,进而阐明Gulo在肾脏发育过程中的潜在生物学功能。方法:1.分离不同发育时期的C57BL/6小鼠胚胎肾脏,利用RT-qPCR检测Gulo的表达情况;培养不同发育阶段的MM细胞,mK3细胞和mK4细胞,通过RT-qPCR检测Gulo在这两种细胞的表达情况。2.在mK3细胞中过表达Gulo,在mK4细胞中敲低Gulo,免疫印迹试验(Western blot,WB)检测细胞的MET标志物和Sine oculis-related homeobox 2(Six2)的变化;细胞划痕实验检测细胞迁移能力的改变。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine,Edu)实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。3.在过表达Gulo的mK3细胞中再转染Six2过表达质粒,在敲低Gulo的mK4细胞转染Six2敲低质粒,Western blot检测细胞的MET过程相关标志物的变化;细胞划痕实验检测迁移能力的改变。Edu实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:1.Gulo在C57BL/6小鼠胚胎肾脏中胚胎期12.5天(embryonic12.5 days,E12.5)表达显著增多,在未分化的MM(mK3)细胞中Gulo表达低于已分化的MM(mK4)细胞。2.过表达Gulo可促进mK3细胞的MET和细胞凋亡过程,抑制细胞增殖。mK4细胞中Gulo的敲低使其上皮特性减弱,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。3.Six2受Gulo负调控。在过表达Gulo的mK3细胞中过表达Six2,在敲低Gulo的mK4细胞中敲低Six2,可部分挽救由于Gulo增多或缺乏引起的MM细胞的MET、增殖和凋亡改变。结论:综上所述,我们的研究结果表明Gulo在小鼠胚胎肾脏中E12.5表达显著升高,未分化的MM(mK3)细胞Gulo表达显著低于已分化的MM(mK4)细胞。此外,Gulo通过负调控Six2从而促进MM细胞的MET和凋亡,抑制其增殖。
【图文】：

1 Gulo 在肾脏发育不同阶段表达情况（RT-qPCRssion in different stages of kidney development (RT** p <0.01, ns. non-significant.育阶段的 MM 细胞中差异表达lo 在不同发育阶段的 MM 细胞中的表达情 PCR（Semi-quantitative PCR，SqPCR）在 的表达。mK3 和 mK4 细胞系代表两个不同早期未经 UB 诱导的 MM 细胞，为间质细胞胞，为已发生部分上皮化的细胞。结果表明而在 mK4 细胞中表达较高（图 2）。

图 1 Gulo 在肾脏发育不同阶段表达情况（RT-qPCR） expression in different stages of kidney development (RT-qPC** p <0.01, ns. non-significant.同发育阶段的 MM 细胞中差异表达 Gulo 在不同发育阶段的 MM 细胞中的表达情况，，半定量 PCR（Semi-quantitative PCR，SqPCR）在 mK3 Gulo 的表达。mK3 和 mK4 细胞系代表两个不同分化阶细胞为早期未经 UB 诱导的 MM 细胞，为间质细胞；mM 细胞，为已发生部分上皮化的细胞。结果表明，Gu低，而在 mK4 细胞中表达较高（图 2）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R329.2

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