CD200FC通过保护血脑屏障来改善脑出血后的神经功能

发布时间：2020-06-15 07:06

【摘要】：研究目的探究CD200-CD200R1信号在自发性脑出血中发生的变化及其起到的作用,尤其是这一信号与血脑屏障的关系,以及通过给予CD200Fc药物的方式进行干预,研究这一信号对于神经功能预后的作用。研究方法采用尾动脉采血,自体血注射法来构建小鼠脑出血模型,所有小鼠品系均为C57/BL6,体重20至24克。在建模后6小时、12小时、24小时、72小时取脑组织,用蛋白质印记法(Western Blot)测出不同时间点CD200R和CD200的表达量的变化。选择它们改变最显著的时间点作为后续实验选择的关键时间点。在脑出血建模后关键时间点,用免疫荧光法对CD200R分别与小胶质细胞、神经元、星形胶质细胞的标记物进行共定位,以验证在脑出血后CD200R的表达部位和其起作用的细胞。在干预实验中,将小鼠随机分成对照组、脑出血组、CD200Fc治疗组、普通IgG对照组,在建模后1小时按每克体重0.08微克的剂量给药。在建模后第24小时用依文思蓝法测各组小鼠血脑屏障的渗漏程度。此外,按以上四个分组建模和给药后,在建模后第24小时测各组小鼠的加西亚评分,连续一周测量各组小鼠的各项长期行为学,包括失足率、转角试验、疲劳棒试验。所有数据采用GraphPad Prism v.6.02进行统计分析,并且用均数±标准差(mean±SD)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多重比较用Tukey。P0.05为差异有统计学意义。研究结果(1)小鼠脑出血后脑内CD200R1表达量减少,在24小时降到最低并且在72小时回升;CD200表达量在24小时明显降低;(2)小鼠脑内CD200R1主要表达在小胶质细胞上,而星形胶质细胞和神经元上几乎没有表达;(3)脑出血后给予CD200Fc能在24小时之时检测到对小鼠血脑屏障的保护;(4)脑出血后给予CD200Fc能在短期和长期均显示出对小鼠的神经功能学改善。结论小鼠脑内CD200R主要表达在小胶质细胞上,并且在脑出血后其表达量减少,至24小时达到最低,脑出血后一小时给予CD200Fc治疗可以减轻第24小时的血脑屏障渗漏,并对近、远期神经功能学产生改善作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.34;R-332
【图文】：

后脑,免疫印迹,浙江人,免疫印迹法

浙江人学硕士学位论文逦正义结栗逡逑２结果逡逑２．１脑出血后ＣＤ２００和ＣＤ２００Ｒ１的表徸量逡逑为了邋了解脑出血后ＣＤ２００／ＣＤ２００Ｒ１的自然变化，我们用免疫印迹法检测了逡逑脑出血后各个时间点的小鼠脑姐织中ＣＤ２００和ＣＤ２００Ｒ１的表达水平。结果显示逡逑ＣＤ２００的表达在小鼠脑出血后２４ｈ降低（与对照组比ｐ＜０．０５，邋ＦｉｇｕｒｅｌＢ），而逡逑ＣＤ２００Ｒ１的表达自脑出血后６邋ｈ即开始持续降低（与对照组比ｐ＜邋０．０５，Ｆｉｇｕｒｅ逡逑１Ａ），在第２４小时达到最低值，并于７２ｈ观察到明显的回升（与２４小时组比ｐ逡逑＜０．０５，邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１Ａ）接近假手术组的水平。每一组各使用了邋４只小鼠。逡逑

共聚焦,生理状态,图像显示,胞体

浙江人‘７：硕丨．？学位论义逦ｉｌ－：文２．２邋ＣＤ２００Ｒ１在血肿周围组织的表达定位逡逑为了解ＣＤ２００Ｒ１在小鼠脑内表达于何种细胞，分别对来自假手术组和血组的小鼠脑组织切片样本进行荧光共定位染色，着重观察基底节区，即血围区域。共定位染色的结果显示ＣＤ２００Ｒ１在对照组和脑出血组的小胶质细均有表达（Ｆｉｇｕｒｅ２Ａ－２Ｂ），而在星形胶质细胞和神经元上没有检测到ＣＤ２０表达ＣＦｉｇＵｒｅ２Ｃ－２Ｄ）。在假手术组中，小肢质细胞上的Ｉｂａ－１信号呈现静息胞体小树突多的形态，且ＣＤ２００Ｒ１信号与Ｉｂａ－１重合范围比例较大；而在脑后２４小时的小鼠脑组织切片样本中，Ｉｂａ－１阳性小胶质细胞呈现出激活状态有的胞体大而突起少的形态，此外，不仅ＣＤ２００Ｒ１阳性的细胞较少，ＣＤ２０与Ｉｂａ－１重合的范围也较小。假手术组和脑出血组各使用了邋４只小鼠。逡逑Ａ逦Ｓｈａｍ逦邋Ｂ邋逦ＩＣＨ邋２４ｈ逦逡逑

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