TPRV1通道在大鼠硬脑膜炎症汤偏头痛模型中的作用及其机制研究

发布时间：2020-06-16 11:10

【摘要】：研究背景偏头痛是一类临床上反复或周期性发作的神经-血管功能障碍头痛疾病,其患病率及致残率高,被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为致残率最高的疾病之一,严重影响患者的生存质量,给家庭和社会带来严重的经济负担。偏头痛的发病机制尚未完全阐明,目前认为它是一种对于体内或体外环境的突然变化通过三叉神经血管反射传导而产生的一种疼痛性疾病。硬脑膜是颅内重要的疼痛感受部位,三叉神经密集分布在硬脑膜基质及血管区域。瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)属于瞬时受体通道家族,在颅内主要分布于痛觉感觉神经元。他们都是非选择性阳离子通道,但对钙离子高通透。TRPV1通道有内源性、外源性等多种激活剂,如辣椒素。当通道开放激活后,钙离子流入胞内,启动一系列级联反应,介导P物质(substanceP,SP)和降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)的释放,SP、CGRP 是偏头痛发病机制当中的两个下游分子,引起三叉神经血管系统激活。目的本课题拟通过TRPV1通道的激活和阻断,对比硬脑膜炎症汤偏头痛模型各组大鼠行为学和生化指标的变化,进一步阐释TRPV1通道在偏头痛发病机制中的作用。方法将40只成年Sprague-Dawley大鼠随机分为四组,采用硬脑膜炎症汤法建立大鼠偏头痛模型,各组大鼠分别给予腹腔注射TRPV1激活剂(辣椒素)、TRPV1阻断剂(辣椒平)、CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37)、生理盐水,对比各组大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)、三叉神经脊束核尾侧亚核(spinal trigeminal nucleus caudalis,TNC)、高颈段 C1-C2、延髓头端腹内侧区(rostral ventromedial medulla,RVM)、导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)的c-Fos、CGRP的变化,颈静脉血SP、CGRP浓度及大鼠眶周痛阈的变化。结果在硬脑膜给予炎症汤刺激后,大鼠出现眶周机械痛觉阈值持续性下降,第3h时间点辣椒平组较生理盐水组的痛阈升高,CGRP受体拮抗剂组较生理盐水组的痛阈升高,辣椒平组的痛阈与CGRP受体拮抗剂组无统计学差异。采集大鼠颈静脉血进行SP、CGRP浓度测定,可见辣椒素组SP、CGRP浓度较生理盐水组的升高,辣椒平组SP、CGRP浓度较生理盐水组的减低,CGRP受体拮抗剂组SP、CGRP浓度较生理盐水组的减低,辣椒平组的SP、CGRP浓度与CGRP受体拮抗剂组无统计学差异。在TG、TNC、高颈段、RVM等脑区,免疫荧光半定量测定显示辣椒素组较生理盐水组的c-Fos、CGRP表达增多,辣椒平组c-Fos、CGRP表达较生理盐水组的减少,CGRP受体拮抗剂组c-Fos、CGRP表达较生理盐水组的减少,辣椒平组的c-Fos、CGRP表达量与CGRP受体拮抗剂组无统计学差异。在PAG区,c-Fos半定量结果同其他脑区,而CGRP表达测定可见辣椒素组较生理盐水组表达增多,辣椒平组和CGRP受体拮抗剂组CGRP表达较生理盐水组的减少,CGRP受体拮抗剂组的CGRP表达较辣椒平组的减少。结论TRPV1通道参与偏头痛的发病过程,其激活剂可加重伤害性痛觉行为表现,反之TRPV1的阻断可以减弱伤害性痛觉行为表现,与使用CGRP受体拮抗剂类似。CGRP作用于TG、TNC、高颈段C1-C2、RVM、PAG等区域,这些脑区参与了痛觉通路的上传。TRPV1通道受体拮抗剂或成为偏头痛治疗新靶点。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R747.2;R-332
【图文】：

实验材料,方法,偏头痛,研究技术

实验［１１］，部分为离体实验［１２］，但是缺乏同期给予ＴＲＰＶ１激活剂、ＴＲＰＶ１阻断剂、逡逑ＣＧＲＰ受体拮抗剂，在偏头痛动物模型上进行横向对比研究。因此我们设计本实验（本逡逑研究技术路线如图１所示），探讨ＴＲＰＶ１通道在偏头痛发病机制中的作用。逡逑６逡逑

示意图,置管,过程,示意图

在钻孔处后方３＿处呈等边三角形再钻两个直径为ｌｍｍ的孔，注意不要钻透，并同逡逑样注意降温保护颅骨。旋进固定螺丝，注意不要旋透颅骨，与刺激孔呈现三角形结构逡逑（图２）。以适量齿科粉、义齿基托树脂将导管套管及固定螺丝包裹固定，注意等树逡逑脂干燥后再进行缝皮，缝皮处碘伏消毒，予以肌肉注射抗生素（８万ＩＵ青霉素）。恢逡逑复７天开始分组及给药。逡逑图２偏头痛模型置管过程示意图逡逑１０逡逑

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