肌腱内注射Lp-PRP与Lr-PRP治疗兔肌腱病模型的疗效研究

发布时间：2020-06-27 19:45

【摘要】：研究背景:肌腱病是一种临床常见疾病,主要患病人群是运动员及平时运动少的中年人。目前的一些体外研究表明,不同的制备方式制成的PRP(Platelet-Rich Plasma,富血小板血浆)制品中存在细胞成分的差异:如白细胞,血小板以及纤维蛋白原,尤其是白细胞含量的差异,可能就是PRP对肌腱病临床疗效不确切的主要原因之一。但是目前尚没有关于在体内肌腱病环境下PRP中白细胞的影响的相关研究。PRP对肌腱病治疗中,白细胞成分发挥影响的具体机制也尚不明确。研究方法:兔跟腱局部注射胶原酶4周建立肌腱病动物模型后被随机分成3组,分别用(1)200 μLLp-PRP(Leukocyte-Poor PRP,去白细胞的富血小板血浆)(n=8),(2)200 μL Lr-PRP(Leukocyte-Rich PRP,富白细胞的富血小板血浆)(n = 8),以及(3)200 μL 生理盐水(n = 8)对损伤跟腱局部进行注射治疗。治疗完成4周后,采集治疗的跟腱组织,通过MRI扫描,HE及Masson染色,组织学评估,TEM(TransmissionElectron Microscopy,透射电子显微镜)扫描等方法对治疗结果进行评估,采用统计学方法分析Lp-PRP组,Lr-PRP组和对照组之间治疗结果的差异。并使用Elisa对肌腱组织中IL-1β,TNF-α及IL-6细胞因子进行定量分析,使用RT-PCR测定肌腱组织中MMP-1,3,9及TIMP基因表达水平来初步探究白细胞在PRP治疗肌腱病过程中发挥影响时与细胞因子及相关基因表达的联系。研究结果:跟腱组织MRI扫描结果显示在T2加权图像上,Lr-PRP组和对照组的平均信号强度显著高于Lp-PRP组。HE及Masson染色的组织学结果显示Lp-PRP组的炎症评分,细胞密度评分及总评分均显著优于Lr-PRP组(P=0.001)和对照组(P0.001)。TEM扫描结果显示Lp-PRP组的胶原纤维直径相比于Lr-PRP组更大(P0.001),Lp-PRP组的胶原纤维密度显著低于Lr-PRP组(P0.001)。Elisa实验结果显示Lp-PRP组的IL-6水平显著低于Lr-PRP组(P=0.001)和对照组(P=0.21)。RT-PCR结果显示Lp-PRP组Ⅰ型胶原基因的表达量显著高于对照组(P=0.004),但与Lr-PRP组无显著差异。Lp-PRP组和Lr-PRP组的MMP-1和MMP-3基因的表达量均显著低于对照组,但只有Lp-PRP组的TIMP-1基因表达量显著低于对照组(P=0.024)。研究结论:相比于Lr-PRP,Lp-PRP更能促进肌腱病中肌腱的修复,是临床治疗肌腱病的更优选择。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R686.1;R-332
【图文】：

图１．邋Ｌｐ－ＰＲＰ及Ｌｒ－ＰＲＰ制备流程示意图逡逑１．２．２．２实验流程设计及肌腱病动物模型制作逡逑１．分组。本实验共使用３１只体重在２．５－３千克之间的新西兰大白兔，其中随机取逡逑４只兔子作为正常组，不做任何处理，其余２７只兔子将进行造摸处理。逡逑２．造摸。使用５ｍｌ注射器将２ｍｌ／ｋｇ的１０％水合氯醛缓慢注射入兔耳缘静脉内进逡逑行静脉麻醉，麻醉完成后使用剃毛器将兔子左侧足跟附近兔毛剃净，并使用５％聚逡逑维酮碘溶液对预注射部位附近进行消毒。注射时使用２９ｇ针头在跟骨上方５＿处逡逑进针，针头刺入跟腱后再沿着跟腱长轴缓慢进针约１0＿。然后一边将针头缓慢从逡逑跟腱中退出，一边将Ｉ型胶原酶注入跟腱中，每只兔子注射３００ＵＩ胶原酶［４１］。注逡逑射胶原酶４周后，造模即完成。此时从２７只兔子中随机选取３只兔子，于耳缘静逡逑脉注射２０ｍｌ空气进行安乐死后，采集左侧跟腱组织进行ＨＥ染色，以验证造模是逡逑否成功。逡逑

浙江大学博士学位论文逦第一部分逡逑式在左侧跟腱中注射（１）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｐ－ＰＲＰ，邋（２）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｒ－ＰＲＰ，（３）邋０．２ｍＬ逡逑的生理盐水［４１］。ＰＲＰ治疗４周后，实验兔子将被安乐死并取出左侧跟腱组织进行逡逑后续实验。逡逑

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本文编号：2732021