基于CYP2D1-null大鼠模型的盐酸文拉法辛和金雀花碱的代谢研究

发布时间：2020-07-10 15:29

【摘要】：细胞色素P450是药物代谢中的一个重要酶系,具有催化内源性以及外源性物质代谢的作用,被称为“肝药酶”。在CYP2D亚家族中,CYP2D6是遗传多态性特征最为明显、研究最全面的一类酶,但是它的含量在肝脏中却只有细胞色素P450酶的2%。CYP2D6是非常重要的药物代谢酶,约1/4的临床药物可以被CYP2D6酶代谢,盐酸文拉法辛和金雀花碱就是其中具有代表性的两种。据相关文献报道,人的CYP2D6和大鼠的CYP2D1是直系同源基因,他们有着高达72%的同源性。同时大鼠相比于其他物种而言,在各方面和人更为接近,尤其是针对于某些疾病的研究,更适合作为研究对象。因此,我们尝试利用大鼠模型来模拟研究盐酸文拉法辛和金雀花碱在人体内的药效与代谢情况。我们实验室前期利用CRISPR/Cas9技术构建CYP2C11-null和CYP2D1-null两种大鼠模型来分别模拟CYP2C9和CYP2D6慢代谢人群。其中本研究利用CYP2D1-null大鼠模型,研究了盐酸文拉法辛和金雀花碱的代谢和药效学影响,阐明CYP2D6慢代谢人群对盐酸文拉法辛和金雀花碱的影响,为指导临床疾病监测和临床合理用药提供了科学借鉴。研究主要结果如下:1.CYP2D1-null大鼠中盐酸文拉法辛的药效学研究利用分养和慢性不可预见性刺激的方式对大鼠造模20 d后,对抑郁状态下的大鼠进行灌胃给药14 d,评价抑郁状态下野生型(WT)大鼠和CYP2D1-null大鼠对盐酸文拉法辛的药效学影响。造模20 d后的实验结果发现,与空白组的大鼠相比,抑郁状态下大鼠的体重,饮食,1%糖水偏好和旷场运动水平显著性降低(P0.05),说明抑郁症模型造模成功,可以用于抗抑郁药盐酸文拉法辛的药效学研究。此外,实验结果还发现在同品系间,雌性大鼠比雄性大鼠进入抑郁状态更快。在盐酸文拉法辛治疗2周后发现,在同性别组间,相比于给药组的野生型大鼠,CYP2D1-null大鼠的体重,饮食量,1%蔗糖偏好,运动水平,去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)水平有显著性差异,P0.05。2.CYP2D1-null大鼠肝微粒体对盐酸文拉法辛体外代谢研究利用高效液相色谱法,对比研究了CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠肝微粒体对盐酸文拉法辛的体外代谢活性。实验结果发现,与野生型大鼠相比,CYP2D1-null大鼠肝微粒体对盐酸文拉法辛的K_m值升高(P0.05),最大反应速率V_(max)及清除率CL_(int)降低。此外,在不同性别组间也有差异。实验结果表明,CYP2D1-null大鼠肝微粒体对盐酸文拉法辛的体外代谢活性降低。3.盐酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠体内的药代动力学研究本研究在灌胃给药后,从大鼠的眼球后静脉采集血样,利用高效液相来检测36小时内不同时间点的盐酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠体内的血药浓度变化。实验结果发现同性别组间CYP2D1-null雄鼠的表观分布容积和清除率比野生型雄鼠小,但是CYP2D1-null雄鼠的AUC_((0-t))、AUC_((0-∞))、C_(max)和T_(max)较大。实验结果表明,盐酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠体内的代谢速率变慢。4.CYP2D1-null大鼠肝微粒体对金雀花碱体外代谢研究利用高效液相色谱,对比研究了CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠肝微粒体对金雀花碱的体外代谢活性。实验结果发现与野生型大鼠相比,CYP2D1-null大鼠肝微粒体对金雀花碱的K_m值升高(P0.05),最大反应速率V_(max)及清除率CL_(int)降低。此外,在不同性别组间也有差异。实验结果表明,CYP2D1-null大鼠肝微粒体对金雀花碱的体外代谢活性降低。综上所述,得到以下结论:药效学实验结果发现,盐酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠中的抗抑郁作用略弱。在体外代谢活性中发现,CYP2D1-null大鼠肝微粒体对盐酸文拉法辛和金雀花碱的代谢活性降低。体内药代动力学实验发现,盐酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠体内的代谢能力降低。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R-332;R96
【图文】：

羽扇豆

中盐酸文拉法辛和金雀花碱的代谢不同的含有碱性氮原子的药剂D6 功能性酶的个体不会代谢喹胍，右美沙芬和可待因等有增加不良反应的风险。物金雀花、黄花羽扁豆的全草中国种子植物科属辞典》，性；黄花羽扁豆始载于《东北植效。白屈菜为罂粟科白屈菜属、肾经，具有清热解毒，止痛

大鼠,亚型鉴定,基因型鉴定,行为能力

成员在物种间的多样性和底物特异性存预测人类 CYP2D6 依赖性药物代谢的途径模型，我们课题组前期通过 CRISPR/模型（CYP2D1-null），其 4 号外显子 7b繁殖，基因型鉴定以及表型鉴定。研究发现在外观，行为能力以及繁殖能力均无明显异常。P450 酶主要亚型鉴定发现 CYP著诱导，CYP1A2，CYP2E1 和 CYP2B 的在CYP2D1-null大鼠中的9个潜在脱靶位

大鼠,蔗糖,水饮,饲料消耗量

消耗量测定：在测定当天早上九点将空白组分笼，1 大鼠鼠粮，在次日上午九点，称量 24 h 后大鼠鼠粮的的饲料消耗量。食物消耗量以 24 h 的摄入食物量（m糖水消耗实验：在实验前，预先训练大鼠饮用蔗糖水禁食 24 h 后，给予大鼠 1%蔗糖水 24 h，称量 24 h 前 24 h 内的蔗糖水饮用量。蔗糖水消耗量按照 24 h 摄 g）评定。实验：将大鼠置于 80 cm*80 cm*50 cm 的敞箱中，如后，运用 TSE 多功能条件反射实验系统自动记录其在其总的移动距离。每只大鼠在评测完后，清理干净敞箱以消除气味，避免对下一只大鼠的测定造成干扰

【参考文献】